关注罕见 | 第二十八期：血友病（Hemophilia）

血友病（Hemophilia）是X连锁隐性遗传性出血性疾病，由位于X染色体Xq28的F8基因或Xq27的F9基因发生致病性变异，分别导致凝血因子Ⅷ (FⅧ) 或凝血因子Ⅸ (FⅨ) 的合成与功能障碍，临床表现为凝血酶生成障碍引发的自发性/创伤后出血。全球血友病的实际患病率约为每10万男性居民中有约17.1人。

其中，FⅧ缺乏所致血友病A (HA)占80%-85%，FⅨ缺乏所致血友病B (HB)占15%-20%。根据血浆凝血因子活性 (FⅧ:C/FⅨ:C) 水平，可分为重型 (<1 IU/dL)、中型 (1-5 IU/dL) 及轻型 (5-40 IU/dL)。

图源Insights into the Molecular Genetic of Hemophilia A and Hemophilia B: The Relevance of Genetic Testing in Routine Clinical Practice

血友病的核心病理机制在于凝血级联的内源性途径在凝血酶爆发 (thrombin burst) 阶段被中断。正常止血过程中，活化的凝血因子Ⅸa (FⅨa) 需与其辅因子FⅧa、Ca²⁺及血小板磷脂表面结合，形成内源性十因子酶复合物 (intrinsic tenase complex)。该复合物催化凝血因子Ⅹ(FⅩ)活化为FⅩa的效率极高，进而驱动凝血酶原酶复合物 (prothrombinase complex) 组装，实现凝血酶 (thrombin) 的爆发式生成，最终形成稳定的交联纤维蛋白凝块。

图源默沙东

血友病A主要是由F8基因突变或缺失导致凝血因子Ⅷ缺乏引起的。凝血因子Ⅷ是一种糖蛋白，分子量约330KD，主要由肝细胞合成。在凝血过程中，FⅧ作为FIXa的辅因子，在钙离子和磷脂存在的情况下激活凝血因子X，继续完成凝血过程。当FⅧ活性降低时，凝血酶生成延迟，纤维蛋白形成延迟，导致出血不止。

血友病B则主要由F9基因突变导致凝血因子Ⅸ缺乏所致。FIX是一种维生素K依赖性的丝氨酸蛋白酶，分子量约56KD，由肝脏合成。在凝血级联反应中，FIX通过Ca²⁺离子、膜磷脂和FⅧ的相互作用激活因子X。当FIX缺乏时，内源性凝血途径受阻，活化部分凝血活酶时间显著延长。

正常凝血需要Ⅷ及Ⅸ因子水平>正常的30%。血友病患者由于缺乏这些关键因子，导致内源性凝血途径的凝血活酶生成障碍，凝血时间延长。当因子活性低于1%时，患者会出现自发性出血，尤其在关节和肌肉部位。

图源Based on a population PK model to evaluate the relationship between FVIII activity levels and bleeds

基因治疗

重组腺相关病毒 (rAAV) 载体疗法：通过rAAV（如血清型5）将功能性F8（采用B结构域缺失变体）或F9基因（采用高活性Padua变体）递送至肝细胞，实现长期、稳定的凝血因子表达。代表药物包括针对HB的Etranacogene dezaparvovec (Hemgenix®)和针对HA的Valoctocogene roxaparvovec (Roctavian™)，临床数据显示其可显著提升因子水平、降低年化出血率 (ABR)，使大部分患者摆脱常规预防性治疗。

脂质纳米粒（LNP）递送mRNA：可实现FVIII或FIX的短期、高水平表达，适用于围手术期管理或作为免疫调节的桥接策略。

F8 KO小鼠：敲除coagulation factor VIII，F8基因（外显子17），导致凝血因子VIII功能缺失，小鼠表现出凝血时间延长和内出血的症状，可以用于评估VIII功能缺失的治疗策略和技术的疗效。

F9 KO小鼠：敲除coagulation factor IX，F9基因，导致凝血因子IX功能缺失。与血友病A小鼠相比，其症状较为轻微。

F11 KO小鼠：敲除 coagulation factor XI，F11，导致小鼠缺乏凝血因子XI，与血友病A和血友病B相比，其出血症状更加轻微。

R333Q-hFIX小鼠：通过定点敲入携带R333Q错义突变的hF9基因构建，表达有抗原性但无活性的FIX蛋白（CRM⁺），用于模拟低抑制物风险的“低免疫原性”表型研究。

R29X-hFIX小鼠：引入R29X无义突变，导致FIX蛋白完全缺失（CRM⁻），是评估高风险基因型下治疗安全性的关键模型。

基因治疗为罕见病带来了希望，但其研发和验证离不开动物模型的支持。明迅生物借助自主研发的TurboMice™技术已研发了多个罕见病小鼠模型，TurboMice™技术突破了小鼠造模周期长和复杂模型成功率低的技术难题，可实现几乎任何目标基因位点的编辑，可短至2个月由胚胎干细胞直接制备完整纯合基因编辑小鼠模型。

明迅生物可根据客户需求定制各类MMA小鼠模型，如F8 KO小鼠、F9 KO小鼠、F11 KO小鼠、R333Q-hFIX小鼠、R29X-hFIX小鼠，欢迎各位老师来咨询。

参考资料：                

[1]Pezeshkpoor B, Oldenburg J, Pavlova A. Insights into the Molecular Genetic of Hemophilia A and Hemophilia B: The Relevance of Genetic Testing in Routine Clinical Practice. Hamostaseologie. 2022 Dec;42(6):390-399. doi: 10.1055/a-1945-9429. Epub 2022 Dec 22. PMID: 36549291; PMCID: PMC9779947.

[2]默沙东诊疗手册 

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[4]李杰, 闫振宇. 血友病鼠模型的构建及研究进展[J]. 中国比较医学杂志,2019,29(6):141- 146.

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