艾必赛知识问答第一期
抗体结构与抗原识别:从重链轻链到Fab/Fc功能
抗体是什么?
抗体(Antibody),又称免疫球蛋白(Immunoglobulin, Ig),是由B淋巴细胞分泌的一类高度特异性的蛋白质,能识别并中和外来病原体。它们广泛应用于科研、诊断与治疗开发中,是生命科学领域不可或缺的分子工具。
Fig.1.抗体结构示意图(图源DOI: 10.1007/978-3-319-42316-6_10)
抗体结构与分类可以为我详解一下吗?
抗体的基本结构呈“Y”字形,由两条重链(Heavy Chain, HC)和两条轻链(Light Chain, LC)通过二硫键连接形成。
重链(Heavy Chain)
决定抗体的类别(isotype),即IgG、IgA、IgM、IgD、IgE。
每条重链含有一个可变区(VH)和三个或四个恒定区(CH1、CH2、CH3/CH4)。
Fc区域主要由重链恒定区构成,介导免疫效应功能(如补体激活、Fc受体结合)。
重链亚型(以人源为例)
|
抗体类型 |
重链类型 |
|
IgG |
γ链(gamma) |
|
IgA |
α链(alpha) |
|
IgM |
μ链(mu) |
|
IgD |
γ链(gamma) |
|
IgE |
ε链(epsilon) |
轻链(Light Chain)
分为κ链(kappa)和λ链(lambda)两种类型。
每个抗体分子中,轻链类型要么全为κ,要么全为λ,不混合出现。
每条轻链包含一个可变区(VL)和一个恒定区(CL),主要参与抗原识别。
轻链种类在不同物种中比例不同,如人类中κ链较常见,而鼠类中λ链比例更高。
Fab 与 Fc:抗体的功能模块
抗体可通过蛋白酶(如木瓜蛋白酶、肠激酶)酶切为两个主要功能片段:
Fab(Fragment antigen-binding):由轻链和重链的可变区构成,是抗原结合的功能区域。
Fc(Fragment crystallizable):由重链恒定区构成,负责与免疫系统成分(如Fc受体、补体蛋白)结合,触发免疫效应反应,如ADCC、CDC等。
抗体类型分类有哪些?
抗体依据重链恒定区的结构不同,分为五类,各具独特功能与分布:
|
类型 |
分子结构 |
功能特点 |
分布 |
|
IgG |
单体 |
血清中最丰富,可穿胎盘,具中和和调理功能 |
血液、组织液 |
|
IgA |
单体/二聚体 |
抗病毒、抗细菌,参与黏膜免疫 |
唾液、乳汁、泪液等 |
|
IgM |
五聚体 |
初次免疫应答首发抗体,补体激活强 |
血液 |
|
IgD |
单体 |
B细胞膜表面表达,功能不明确 |
B细胞表面 |
|
IgE |
单体 |
与过敏反应、抗寄生虫免疫相关 |
组织粘膜,结合肥大细胞 |
Fig.2.五种抗体结构示意图(图源: ScienceDirect Topics, Immunoglobulin D Antibody - an overview)
抗原基础与分类
抗原是能被抗体或T细胞识别的分子,具有以下特性:
|
类型 |
定义 |
|
免疫原(Immunogen) |
能引发免疫反应并被识别 |
|
抗原(Antigen) |
可被识别但不一定激活免疫反应 |
|
半抗原(Hapten) |
本身无免疫原性,需与大分子结合后激发反应 |
|
表位(Epitope) |
抗体或T细胞实际识别的抗原决定簇 |
Fig.3.抗原与表位示意图(图源: Wild, D. (Ed.). (1996). Immunoassays: A practical approach. Oxford University Press)
实验抗体的选择有什么建议呢?
为了保证实验结果的可靠性,抗体选择需从以下几方面考虑:
实验类型匹配:如WB、IHC、ICC、ELISA、流式细胞术(FACS)等,建议选用已在目标应用中验证的抗体。
蛋白特性匹配:包括种属、修饰形式(磷酸化/乙酰化等)、蛋白定位(膜蛋白/核蛋白)等。
验证策略可靠:优选经KO验证、互补验证、IP-WB验证等方式确认的高可信度抗体。
抗体来源及其应用差异
多克隆抗体(pAb)
来源:将抗原免疫动物(如兔、羊等)后收集血清;
特点:识别多个表位,适用于抗原低表达或变异样本。
单克隆抗体(mAb)
来源:杂交瘤细胞系产生;
特点:识别单一表位,批间一致性高,适合定量实验与机制研究。
抗体纯化方式与优化
实验级抗体通常需从上清或血清中纯化。常见纯化方式包括:
|
方法 |
原理 |
适用情境 |
|
Protein A |
结合IgG Fc区 |
人IgG1/IgG2/IgG4 |
|
Protein G |
覆盖更广Fc种类 |
鼠IgG、多物种 |
|
亲和层析 |
针对抗原特异识别 |
提升纯度与特异性 |
|
阴阳离子交换层析 |
基于电荷差异分离 |
特殊抗体分离需求 |
注意事项:选择Protein A/G时应参考抗体种属与亚型,以免影响结合效率或纯度。
提高特异性的方法:精细纯化不可忽视
高特异性抗体对于中和实验、阻断实验、流式多色共染至关重要。建议在制备阶段使用:
严格的亲和纯化流程;
分子筛除杂;
低内毒素处理;
严格验证的抗原源。
只有这样,才能确保抗体在关键实验中具备高信噪比、低背景的表现。
结语
从结构基础到功能分工,从抗原识别到抗体筛选与纯化,全面理解抗体的核心知识,将极大提升实验设计的合理性与数据的可重复性。建议科研工作者在实验初期就系统规划抗体选择与验证流程,为后续研究打下坚实基础。
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参考文献:
Díez, P., & Fuentes, M. (2016). Proteogenomics for the comprehensive analysis of human cellular and serum antibody repertoires. In *Advances in experimental medicine and biology* (Vol. 926, pp. 153-162). Springer. https://doi.org/10.1007/978-3-319-42316-6_10
Elsevier. (2025). *Immunoglobulin D Antibody - an overview*. ScienceDirect Topics. https://www.sciencedirect.com/topics/immunology-and-microbiology/immunoglobulin-d-antibody
Wild, D. (Ed.). (1996). *Immunoassays: A practical approach*. Oxford University Press.
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