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| 图1. 用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒（货号：22900）检测HeLa细胞中的ROS。将HeLa细胞以15,000个细胞/ 90 µL /孔在Costar黑色/透明底部96孔板中过夜接种。将细胞未经处理（对照）或在37°C下用1 mM H2O2或100 µM叔丁基氢过氧化物（TBHP）处理30分钟。加入ROS Brite 670工作溶液（100 µL /孔），并在5％CO2和37°C的培养箱中孵育1小时。使用FlexStation（Molecular Devices）以底部读取模式在Ex / Em = 650/675 nm（cut off= 665 nm）处检测荧光信号。 |
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| 图2. 在Costar黑色/透明底部96孔板中，用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒染色的Hela细胞图像。A：未经处理的对照细胞。B：细胞在染色前用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理30分钟。 |
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| 图3. ROS Brite 700对PBS缓冲液（pH 7.2）中不同活性氧的荧光响应。用Ex / Em ＝ 670 / 700nm测量荧光强度。 |
各种探针可检测的活性氧种类：
01
过氧化氢（H2O2）检测
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| 图1. H2O2浓度由DA单独产生，并具有来自C-syn α 15分钟（浅灰色）、30分钟（深灰色）和60分钟（黑色）的C-终端序列中的各种肽。DA 本身（无肽）随着时间的推移产生越来越多的 H2O2。DA 与 YEMPS 肽的共育增强 H2O2生产，而缺乏肽的 Y127-（EMPSEEGY）和 S129-（NEAYEMP）比 DA 单独或使用 YEMPS 肽产生的 H2O2较少。此外，DA与海氨酸突变肽（YEAPS）的联育在所有条件下产生最高量的H2O2。 |
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| 图2. 使用Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒（货号：11503）在HeLa细胞中细胞内过氧化氢的荧光图像。在37℃下用（左）或不用（右）100 µM过氧化氢处理HeLa细胞90分钟。 |
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| 图3. 使用Cell Meter 细胞内荧光过氧化氢检测试剂盒（货号：11506）检测Jurkat细胞中的过氧化氢。将Jurkat细胞用OxiVision™Green过氧化物探针染色30分钟，并在37°C下用100 µM过氧化氢处理90分钟。用OxiVision™绿色过氧化物探针染色但未进行过氧化氢处理的细胞用作对照。 |
02
过氧化物酶类检测
03
超氧阴离子（O2·-）
04
超氧化物歧化酶（SOD）
05
线粒体内活性氧
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| 图1.使用MitoROS OH580（Cat＃16055）在HeLa细胞中检测羟基自由基的荧光图像。将HeLa细胞与MitoROS OH580工作溶液在37°C下孵育1小时，然后用HHBS洗涤一次。Fenton反应：然后在37°C的1X HBSS缓冲液中，用10 µM CuCl2和100 µM H2O2处理细胞1小时。对照：HeLa细胞未经处理即可保存在1X HBSS缓冲液中。用HHBS洗涤3次后，使用带有TRITC滤光片组（红色）的荧光显微镜测量HeLa细胞。细胞核用Hoechst 33342（Cat＃17530，蓝色）染色。 |
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| 图2.在Costar黑色/透明底部96孔板中，用Cell Meter 荧光法细胞内总ROS活性测定试剂盒染色的Hela细胞图像。A：未经处理的对照细胞。B：细胞在染色前用100 µM氢过氧化叔丁基（TBHP）处理30分钟。 |
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| 图3.使用Cell Meter 荧光细胞内超氧化物检测试剂盒检测Jurkat细胞中的细胞内超氧化物。AMA处理（红色）：将细胞在37°C下用50 µM抗霉素A（AMA）处理30分钟，然后与MitoROS 580孵育1小时。对照（蓝色）：在未经AMA处理的情况下，将细胞与MitoROS 580在37°C孵育1小时。使用流式细胞仪（BD FACSCalibur）在FL2通道上监测荧光信号。 |
06
次氯酸阴离子（ClO-）
07
谷胱甘肽GSH
08
一氧化氮（NO）与过氧亚硝酸（ONOO-）
09
脂质过氧化（MDA）
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