在往期推文中，为大家介绍了hPSC培养试剂及hPSC详细的培养教程（复苏、传代、冻存）。
本期文章将解答客户提出的一系列人多能干细胞（hPSC）培养常见问题，主要针对以下hPSC培养试剂展开分析，希望对您有所帮助~
· NcTarget™ hPSC Medium（货号：RP01020）首宁生物|性能卓越+进口替代 hPSC培养基——ncTarget hPSC Medium
· NcEpic™ hPSC Medium（货号：RP01001）首宁生物ncEpic hPSC Medium助力iPSC衍生细胞药物申报
· Blebbistatin（货号：RP01008）
· hPSC Dissociation buffer（货号：RP01007）
临床级hPSC培养基
首宁生物人多能干细胞（hPSC）培养基是无血清、无需滋养层细胞的临床级/药品级培养基，可用于人胚胎干细胞（hESC）和人诱导多能干细胞（hiPSC）的体外培养，能够长期维持hPSC的三胚层分化潜能和自我更新能力。
你问我答Q&A
Q1
NcTarget 或 NcEpic如何分装？
• 建议操作：
1.实际使用过程中，可根据实际情况，将添加剂分装后冷冻保存（添加剂冻融总次数不超过2次）。
2.基础液不需要分装。
*注：NcTarget或者NcEpic的规格都是500mL，配置成完全培养基后，建议2周内使用完。
Q2
是否可以将NcTarget或NcEpic配置成完全培养基后，再分装冻存起来，等需要的时候解冻使用？
• 不推荐这样操作，冻存后，会影响部分蛋白活性，最终可能会影响细胞状态。
• 建议操作：
1.添加剂分装后冷冻保存（添加剂冻融总次数不超过2次），基础液不需要分装。
2.使用时，配置成完全培养基，完全培养基推荐2周内使用完。
Q3
之前使用其他家的hPSC培养基，是否可以换成NcTarget或NcEpic？是否可以直接切换？
• 可以从其他品牌的hPSC培养基切换成NcTarget或者NcEpic。
• 切换方法：
1.进行培养基切换时（不建议使用刚刚复苏的细胞直接进行体系切换），使用原培养基进行细胞传代，24小时后更换成混合培养基（原培养基与NcTarget或NcEpic按照1：1混合）培养；
2.培养2代后，完全换成NcTarget或NcEpic培养；
3.培养2-3代后，可完全适应新的培养体系，此时可进行细胞冻存处理。
首宁生物 Blebbistatin（RP01008）是广泛应用的非肌肉肌球蛋白II型ATP酶抑制剂。Blebbistatin作用于ROCK-myosinII信号通路，可以阻止多功能干细胞因分离导致的凋亡，在不影响hPSC的自我更新或者多潜能特性的前提下改善分离的hPSC的存活率和克隆效率。
你问我答Q&A
Q1
ROCK通路抑制剂Blebbistatin的作用是什么？可以使用Y27632替代么？
• Blebbistatin的主要作用是抗凋亡，促贴壁，减小操作难度。
• 可以使用Y27632，它们的功能相似。但是Y27632的工作浓度为10μM，而Blebbistatin工作浓度仅为2.5μM，Blebbistatin的经济性更好，性价比更高。
*注：Blebbistatin长期存在会影响细胞的状态。只在复苏和传代的前24小时使用，后续换液的时候需去除。
hPSC Dissociation buffer（RP01007）
含 0.5mM 的EDTA，该消化液经过过滤除菌，可以直接用于多能干细胞的消化。本消化液方便快捷，通常37℃消化8分钟左右就可以消化下大部分多能干细胞。
你问我答Q&A
Q1
在细胞消化时，我看说明书上推荐的是在培养箱中消化6-7分钟左右，取出、观察细胞是否消化好，那么我们该如何判断细胞是否已经消化好？
hPSC Dissociation buffer
消化 hPSC 示例图片
• 不同的hPSC细胞，不同的培养环境，细胞消化时间有差异（大致6-8min，很少超过10min）。
正常情况下，我们建议第1次消化时，在培养箱中消化6-7min，然后取出在显微镜下观察，如图C所示，大部分细胞发亮（贴壁不紧），细胞就消化好了。
Q2
如果消化时间长了，细胞漂起来了，该怎么处理？
• 只需要将细胞悬液转移至15mL离心管中，180*g离心5分钟收集细胞。
Q3
细胞消化液，我看推荐的是EDTA，但是我们没有这种酶，可以使用胰酶或者Accutase来代替么？
• 不推荐胰酶，胰酶会将iPSC消化成单细胞且消化能力较强，不好控制时间（容易将细胞消化破），影响传代后细胞的存活率，也容易积存分化的细胞。
• Accutase是一种温和的消化酶，在需要做单细胞传代时，可以选择这种的，但是常规的传代培养，不推荐使用它。
人多能干细胞（hPSC）试剂
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