在干细胞研究领域，人多能干细胞（hPSC）以其强大的分化潜能和自我更新能力，成为众多科研项目的核心对象。然而，培养 hPSC 的过程存在众多难题。
本期文章，我们延续为客户排忧解难的使命，针对客户反馈的一系列人多能干细胞培养常见问题展开深入探讨——详细解析细胞死亡、分化、变黄等问题背后的复杂成因，并提供切实可行的解决方案，助力大家突破培养瓶颈，让 hPSC 培养工作步入正轨！
• 这是正常现象。iPSC细胞增殖速度快，在培养过程中，会观察到比较多的死细胞聚集在孔的中间。但是如果出现大的细胞团块，成团漂起，这是不正常的，需要警惕。
• 这些黑点是iPSC的碎片或者释放的脂质体一类的物质，正常情况下不会影响细胞的生长的。
• 这些黑点在细胞状态不好的时候，更严重。此时可以通过降低传代细胞密度等方式来调整细胞的状态。等细胞状态调整好后，黑点虽然也会存在，但情况会好很多。
• 确保包被的基质均匀的分布于容器底部。
• 传代接种时确保细胞分散均匀，水平十字摇匀后避免晃动培养板导致细胞聚集于孔的中间部分。
• 把培养板放入培养箱时，需再次水平十字摇匀。
• 原因：
造成iPSC分化的原因有很多，培养基质量问题、培养基反复复温、传代时动作不规范、离开培养箱时间过长等都有可能导致细胞分化。
• 正确做法：
1.确保NcTarget完全培养基储存于4°C，并在2周内用完。每次只预温当次实验所需的培养基，减少NcTarget完全培养基的温度变化，避免培养基中的因子效价下降。
2.如hPSC克隆整体形态良好，零星分化细胞（<1%）出现于克隆周边，可以通过EDTA传代去除。
3.确保传代hPSC的细胞团大小均匀，约20个细胞左右的团块为佳；若细胞团较大，可用5mL移液管轻柔吹打不超过3次，力度要轻且均匀，否则细胞受压过大易产生破损、分化。
4.每次观察时避免将细胞从培养箱中取出超过15 min。
5.若hPSC克隆表现为内部松散，边缘不平滑，分化比例超过20%，则建议废弃。
• 如何去除分化细胞：
iPSC培养阶段出现分化时，可以尝试通过巴斯德吸管去除，同时也可以适当减少消化时间（正常的iPSC比分化的细胞更容易被消化下来）进行去除。
• 主要原因：
由于传代时细胞团消化不彻底或消化接种后细胞团过大，导致在后期培养阶段，中间聚团细胞营养不够，导致分化。
• 建议：
适当延长消化时间，消化后可以轻柔吹打细胞1-2次后再进行接种。
人多能干细胞（hPSC）试剂
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