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【Mascot Newsletter 2020-11】利用Crosslinking功能进行交联肽段的高质量匹配

【Mascot Newsletter 2020-11】利用Crosslinking功能进行交联肽段的高质量匹配 康昱盛
2020-11-26
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欢迎大家前来阅读本期资讯~
本月的重点描述了一种分离和鉴定蛋白质N端肽段的新方法。如果您近期有发表文章,并且希望列举在下一期的Newsletter中,请将相关的PDF文档或URL链接发给我们。
本月的Mascot小贴士说明了客户端有时报错的方式。
如果您有任何意见或问题,请随时联系我们。

你的交联肽段的ID是正确的吗?



化学交联是用于结构解析的强大技术,但是可能匹配的结果数量的几何级数增加使解释具有挑战性。无论是环状连接序列,单链连接的线性序列还是几个不同的肽对(可能是修饰过的),Mascot 2.7都使用相同的评分系统,所以所有与Query匹配的分数都是可以直接比较的。可以直接对候选匹配进行比较和排序。

使用最近发表的从已知的合成DSS交联肽库中获得的数据,我们评估了重要的交联匹配的真实FDR。搜库结果显示Cas9中有大量的单链匹配和完整的交联,包括许多强匹配。我们还详细分析了各种假阳性,并确定了几种具有单链的线性肽,以及一些难以置信的α-β肽段组合。
在控制假阳性的同时,最大限度地提高灵敏度的有用策略是:
· 确保覆盖所有搜库内容
· 仅使用必要的蛋白序列进行搜库,不必再添加其他序列
· 只关注排名第一位的匹配的碎片和可选择的结果


使用Mascot发表的特色文章

在这里,我们重点介绍了最近有趣且重要的文章,该文章采用Mascot进行蛋白质鉴定,定量或表征,如果您想要您的文章也在这里重点推荐,请发给我们 一个PDF或URL。

在这里,我们重点介绍了最近有趣且重要的文章,该文章采用Mascot进行蛋白质鉴定,定量或表征,如果您想要您的文章也在这里重点推荐,请发给我们 一个PDF或URL。

Isolation of acetylated and unmodified protein N-terminal peptides by strong cation exchange chromatographic separation of TrypN-digested peptides
Chih-Hsiang Chang, Hsin-Yi Chang, Juri Rappsilber and Yasushi Ishihama
Molecular & Cellular Proteomics November 2, 2020

作者开发了一种新的方法,通过富集N端肽来表征蛋白质的N端,且不需要衍生化或复杂的处理。该方法使用蛋白酶TyrpN,然后利用强阳离子交换(SCX)色谱法,根据正电荷的数量以及电荷的分布来分离肽段。使得蛋白质N端肽与内部肽分离。

他们通过比较大约4,000个肽对在SCX中的保留时间来评估这种分离,这些肽对的序列仅在末端Lys/Arg的位置上有所不同。TrypN酶解的肽段明显比Typsin类似物有更强的SCX保留能力。这是因为TrypN肽段的N端携带两个带正电荷的基团,而trypsin肽段C端Lys/Arg的正电荷被α-羧基部分中和。 
他们将此方法应用于人胚胎肾细胞裂解液中,在单次LC/MS/MS运行中鉴定了1550个乙酰化肽和200个未修饰的蛋白N端肽,内部肽的污染率不到3%。

Mascot 小贴士


如果你使用Mascot Daemon或Proteome Discoverer等客户端来提交搜库,你可能已经注意到Mascot Server的警告或报错信息有时是不完整的。例如,Daemon可能会报告这样的内容:
Sorry, the database (%s) is not currently available for searching
有点含义模糊。'%s'是一个字符串的占位符,信息应该为:
Sorry, the database (Uniprot_arabidopsis) is not currently available for searching

如果你在你的系统上看到了这个信息,而完整的信息可以让你更容易地找出问题的原因,你可以通过在Mascot Server上查看来获取全文。在Web浏览器中,从你本地的Mascot主页,单击链接到Database Status,然后是Error log。通过将日期和时间与客户端事件的日期和时间进行匹配,应该不难找到完整的信息。


以上就是本月Mascot简讯的全部内容,如果想要了解关于更多Mascot详情,欢迎点击“阅读原文”进入我们的官方网站或直接联系我们。

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