CRISPR/Cas9基因编辑技术学习班
CRISPR/Cas9技术培训背景介绍：
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御，可用来有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已经被广泛用于基因工程，它包含Cas9，crRNA和tracrRNA，其中crRNA含有能够识别20bp的靶向互补序列。Cas9，crRNA和tracrRNA组成复合体，识别并结合crRNA互补的序列，然后解开DNA双链，Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链，RuvC活性位点剪切非互补链，最终导致DNA的双链断裂（DSB），进而实现基因的敲除和插入。
目前，CRISPR/Cas9系统已经广泛用于对哺乳动物细胞，细菌，斑马鱼，小鼠，猪，猴的基因编辑。本学习班将详细讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理，操作流程，理论结合实践，将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。
讲师介绍
这次学习班我们邀请了两位在基因编辑领域具有丰富实操经验的教授作为主讲人，通过三天的系统学习，能让您熟悉并掌握基因编辑技术的核心知识点与详细操作技巧。
第一天与第二天主讲人：李博士
参与德意志研究基金委项目(DFG)用于人类癌症研究的转基因克隆猪模型 (SCHN971/3-1)，博士导师为原英国Roslin Institute克隆羊“多莉”团队的Prof. Dr. Angelika Schnieke，成功构建世界上第一头ROSA26双荧光猪模型，极具有生物医学价值(已发表)。随后，成功构建Kras点突变基因修饰克隆猪模型，该模型为构建胰腺癌大动物模型提供了有力工具，为胰腺癌相关靶向药物开发，寻找新的胰腺癌治疗手段等提供了新的动物模型。
第三天主讲人：王永明教授
研究员，博士生导师，2015年国家青年千人获得者。1997-2001年就读兰州大学生命科学学院并获得学士学位，2001-2004年就读东北师范大学生命科学学院并获得硕士学位，2005-2010年在德国马克斯-德尔布吕克分子医学中心（MDC）做博士生研究，并获得柏林自由大学博士学位。2010-2013年在斯坦福大学医学院从事博士后研究。2013年至今历任复旦大学生命科学学院研究员。在基因编辑领域具有丰富的实践经验，也做出了出色的成绩
付款方式及要求详见报名表文件
优惠政策：提前付款的，可提前拿到学习资料
1. 三人组团报名，每人优惠100元
2. 四人组团报名，每人优惠200元，
3. 五人组团报名缴费，额外带一人免费注册！
参加复听的学员，每人收取600元费用。
下面六个质粒可以选择订购，每个质粒800元 （发票可单独开，也可与会务费开在一起）
前3个一起购买的话，可优惠至600元/个
1，ps330A-cas9-sgRNA（可插入任意20bp靶点序列）
2，ps330S-2-cas9-sgRNA（可用于同时敲除2个靶点的载体，需配合1号使用）
3，p-p53-cas9-GFP （可用于小鼠p53基因敲除的载体）
4，pX458
5，pX459
6，Cpf1
培训时间：2019年5月25-27日（3天） 24日报到
培训地点：上海中兴和泰酒店会议厅，上海市浦东张江高科科苑路866号
主办方：上海循掘生物科技中心
酒店安排：推荐中兴和泰酒店，住宿费用自理，也可自行预订周边酒店
豪华大床房/双床房 500元/天 酒店预定方式见《报到通知及路线文件》
一、需携带具备无线上网功能的电子阅读设备（最好是带电脑），会场会布置足够的电源插座
二、会场不得录音录像，允许重点拍照
三、若您需要通过会务组预定酒店，请您一定在报名表上备注清楚房型要求和日期
课程安排
时间安排 |
课程表 |
介绍 |
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第一天 (李博） |
9:00-10:30 |
基因编辑技术介绍 |
基因编辑技术原理 基因编辑技术应用 三种基因编辑技术（ZFN、TALEN和CRISPR/Cas9）介绍 其他类型的CRISPR核酸酶介绍（Cpf1, SaCas9,人工改造后的Cas9） |
10:30-10:45 |
茶歇 |
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10:45-12:00 |
常用载体和网站介绍 |
CRISPR/Cas9常用载体介绍 基因序列分析（请自带可无线上网之笔记本电脑或手机，在线设计演练） 设计gRNA的网站（在线设计演练） 构建gRNA表达载体（设计演练） PCR引物设计（设计演练 |
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12:00-13:30 |
午饭及午休 |
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13:30-15:00 |
基因敲除敲入方法 |
基因敲除的方法（设计演练） 基因敲入的方法（设计演练） |
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15:00-15:20 |
茶歇 |
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15:20-17:50 |
脱靶检测及后续实验方法 |
检测脱靶的方法 提高CRISPR/Cas9特异性的方法 CRISPR/Cas9导入细胞的方法 |
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第二天 （李博） |
9:00-10:30 |
Px330质粒系统讲解 |
px330质粒系统介绍。 sgRNA oligos模板退火方案。 退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体连接详细方案。 连接产物转化到大肠杆菌（DH5α）。 转化产物涂板培养。 鉴定插入oligo后的基因编辑质粒ps330质粒体系 构建同时敲除两个基因的质粒体系 |
10:30-10:45 |
茶歇 |
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10:45-12:00 |
CPF1质粒体系讲解 |
如何构建CRISPR/Cpf1质粒体系。 CRISPR/Cpf1质粒体系鉴定。 |
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12:00-13:30 |
午饭及午休 |
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13:30-15:00 |
动物实验方法讲解 |
Cas9的多功能系统（如Cut, Nick, Activate, dCas9-FokI）的详细介绍。 利用CRISPR/Cas9构建基因修饰小鼠方法介绍和实际操作方案 CRISPR/Cas9相关基因修饰小鼠模型介绍和操作方案 利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大动物（猪、猴）方法介绍和实际操作方案 CRISPR/Cas9与基因修饰大动物模型介绍和详细操作方案 |
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15:00-15:20 |
茶歇 |
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15:20-17:30 |
利用CRISPR/Cas9技术编辑动物细胞系 |
CRISPR/Cas9质粒细胞转染方法 阳性细胞克隆筛选 基因编辑细胞系的建立&基因修饰情况分析方法 |
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第三天 (王教授） |
9:00-10:30 |
基因编辑技术原理 基因编辑技术应用 |
基因编辑技术原理 基因编辑技术应用 四种基因编辑技术（ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9和Base editor）介绍 |
10:30-10:45 |
茶歇 |
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10:45-12:00 |
基因编辑技术实用技术详解 |
PCR引物设计 CRISPR/Cas9常用载体介绍 构建gRNA表达载体 设计gRNA的网站 gRNA活性检测 |
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12:00-13:30 |
午饭及午休 |
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13:30-14:30 |
基因序列分析及靶点设计 |
基因序列分析 基因敲除的方法（设计演练） 基因敲入的方法（设计演练） 检测脱靶的方法 |
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14:30-14:40 |
茶歇 |
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14:40-15:40 |
CRISPR/Cas9脱靶问题分析，基因编辑技术拓展及答疑 |
提高CRISPR/Cas9特异性的方法 CRISPR/Cas9导入细胞的方法 Base editor的使用方法 CRISPR/Cas9其它应用 根据学员的研究内容，详细答疑如何使用基因编辑工具。 |
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