基因编辑技术与动物模型构建研讨会（网络）
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医药加ZOOM网络会议室 2020年5月30-31日
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御，可用来有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已经被广泛用于基因工程，它包含Cas9，crRNA和tracrRNA，其中crRNA含有能够识别20bp的靶向互补序列。Cas9，crRNA和tracrRNA组成复合体，识别并结合crRNA互补的序列，然后解开DNA双链，Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链，RuvC活性位点剪切非互补链，最终导致DNA的双链断裂（DSB），进而实现基因的敲除和插入。
目前，CRISPR/Cas9系统已经广泛用于对哺乳动物细胞，细菌，斑马鱼，小鼠，猪，猴的基因编辑。本学习班将详细讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理，操作流程，理论结合实践，将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。
讲师介绍：这次学习班我们邀请了在基因编辑领域具有丰富实操经验的教授作为主讲人，通过两天的系统学习，能让您熟悉并掌握基因编辑技术与动物模型构建的核心知识点与详细操作技巧。
成功构建世界上第一头ROSA26双荧光猪模型，极具有生物医学价值(已发表)。随后，成功构建Kras点突变基因修饰克隆猪模型，该模型为构建胰腺癌大动物模型提供了有力工具，为胰腺癌相关靶向药物开发，寻找新的胰腺癌治疗手段等提供了新的动物模型。
1、掌握基因打靶与基因编辑技术(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9)，能够设计sgRNA靶点，构建CRISPR/Cas9质粒，用于基因敲除和敲入。
8、基因编辑工具用于检测新型冠状病毒、基因编辑工具有可能应用于新冠治疗等应用的介绍与拓展。
优惠政策
1.疫情过后，可补差价参加医药加线下同名班
2.参加过医药加同名线下班的学员，只要300元复听费用（推荐新学员的，免收复听费用）
报名电话：客服号 13770587103（微信同号）
填好报名表后，需将报名表发到上面的邮箱，并收到回复方可确认完成报名。
提前支付的老师，若您是支付宝转账，请务必将付款截图一并发送。
基因编辑技术与动物模型构建研讨会日程 |
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日期 |
时间 |
主题 |
详细内容 |
第一天上午 |
9:00-10:30 |
基因修饰技术简介（一） |
基因打靶与基因编辑技术（ZNF, TALENs，CRISPR/Cas9）介绍 |
基因编辑、基因修饰、基因打靶、转基因、基因敲除、基因敲入等专业领域概念梳理 |
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CRISPR/Cas9结构和特点 |
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如何使用CRISPR/Cas9系统对特定基因进行敲除或定点插入（详细方法步骤） |
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拓展如何提高定点敲入效率等知识 |
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10:30-10:45 |
休息 |
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10:45-12:00 |
基因修饰技术简介（二） |
基因编辑工具Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的结构、特点、工作原理 |
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如何使用Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14系统进行编辑 |
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Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14与Cas9的比较 |
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Cas9、Cas12（Cpf1）、Cas13（C2C2）、Cas14的应用和技术展望 |
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上午现场答疑 |
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12:00-13:30 |
午饭及午休 |
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第一天下午 |
13:30-14:00 |
CRISPR（sgRNA）设计方法和相关网站介绍 |
sgRNA设计方法和相关网站介绍 |
CRISPR（sgRNA）的在线设计（在线互动设计演练） |
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14:00-15:30 |
基因编辑实验详细操作 |
gRNA oligos模板退火 |
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退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体连接 |
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连接产物转化到大肠杆菌（DH5α），转化产物涂板培养，CRISPR/Cas9重组子细菌克隆挑取，扩大化培养，鉴定阳性克隆 |
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细胞转染（Electroperation，Nuclefection，Nanofection，X-fection）等介绍与应用拓展 |
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单细胞克隆筛选（有限稀释法，滤纸法、环法、流式分选法等）方法介绍与应用拓展 |
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15:30-15:45 |
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15:45-17:00 |
利用CRISPR/Cas9技术编辑动物细胞系 |
CRISPR/Cas9质粒细胞转染方法 |
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阳性细胞克隆筛选，基因修饰基因组DNA模板快速制备 |
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目的靶基因的基因组DNA片段的PCR扩增，电泳检测PCR产物 |
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PCR产物退火变性，T7E1酶切，电泳鉴定基因修饰情况 |
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17:00-17:30 |
CRISPR/Cas9关键点总结、归纳、拓展 |
基因编辑关键知识点归纳、总结和提炼 |
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CRISPR/Cas9技术应用拓展（如CAB基因敲入方法等介绍） |
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第二天上午 |
9:00-10:30 |
利用基因编辑技术构建基因敲除或敲入小鼠 |
基因工程小鼠的详细分类与比较 |
小鼠受精卵分离和培养 |
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CRISPR/Cas9系统显微注射到小鼠受精卵 |
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受精卵显微注射后回输到代孕母鼠体内 |
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PCR和T7E1分析和鉴定基因敲除小鼠（Founder） |
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基因敲除小鼠基因敲除情况分析 |
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CRISPR/Cas9构建基因敲除小鼠详细实验流程归纳和总结 |
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10:30-10:45 |
休息 |
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10:45-11:15 |
利用基因编辑技术构建大动物模型 |
以大动物猪为例，进行详细介绍基因编辑技术在大动物模型中的应用 |
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利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大型动物（猪）流程 |
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基因修饰大型动物优势 |
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利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大动物（猪）模型介绍 |
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11:15-12:00 |
利用基因编辑技术构建动物模型的详细案例介绍 |
利用CRISPR/Cas9构建基因修饰小鼠方法与相关基因修饰小鼠模型 |
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利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大动物（猪、猴）方法与相关基因修饰大动物模型 |
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拓展基因编辑技术在其它物种中的应用 |
拓展基因编辑技术在其它物种中的应用 |
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12:00-13:30 |
午饭及午休 |
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第二天下午 |
13:30-15:00 |
实验结果的点评与讨论 |
CRISPR/Cas9载体构建讨论 |
目的靶基因的基因组DNA片段的PCR扩增，电泳检测PCR产物结果讨论 |
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PCR产物T7E1酶切，电泳鉴定基因修饰情况结果讨论 |
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Sanger测序鉴定基因编辑结果：CRISPR/Cas9质粒阳性转化子测序结果确认；Sanger测序阅读基因编辑情况；如何从测序色谱图中阅读靶向突变等位基因型 |
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15:00-15:30 |
CRISPR/Cas9脱靶问题分析 |
脱靶产生的原因 |
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脱靶检测方法 |
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降低脱靶问题的方法 |
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15:30-15:45 |
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15:45-16:30 |
基因编辑领域进展大梳理与全面拓展 |
基因编辑技术的应用拓展介绍：SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等应用于检测方面的拓展，Base editing |
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结合当下新型冠状病毒热点，基因编辑工具用于检测新型冠状病毒、基因编辑工具有可能应用于新冠治疗等应用的介绍与拓展 |
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Cas系列突变体的介绍与应用 |
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基因编辑的拓展应用（如应用于杜氏营养肌不良综合征、白内障、消灭蚊子、植物中的应用、细菌中的应用等） |
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基因编辑工具的伦理问题于讨论 |
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本次会议主办方采用专业版ZOOM网络会议软件，参会需提前安装好ZOOM会议软件。可无需注册，直接参会。 |
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为帮助广大初学者和具有一定基础的研究者能更好掌握生信分析,meta,基因编辑，网络药理，科研作图,临床研究等套路与常用技能， 考虑目前在疫情期间的实际情况，我们决定在5-6月份召开下面10门在线学习班，为了保证学习效果，我们采用国际顶级的Zoom网络会议平台授课，可回放，效果体验好！
6月课程已安排
八晚！全转录组高通量测序&芯片数据生信分析（网络）研讨会（点击了解详情）
2020年6月八晚！回顾性临床研究从入门到精通（网络）研讨会
2020年5月30-31日基因编辑技术与动物模型构建研讨会（网络）
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2020.6.13-14临床预测模型构建与统计分析进阶（网络）研讨会
2020年6月13-14日中药网络药理学的研究策略与使用技能研讨会
2020年6月20-21日全国循证医学 Meta 分析与网状Meta（网络）研讨会
2020.6.20-21调控性非编码RNA与外泌体研究策略（网络）研讨会
2020年6月25-27日TCGA&GEO生信高通量数据挖掘分析（网络）研讨会
2020.6.26-27高分SCI文章与标书作图（暨AI软件作图）研讨会
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