xMAP 实验策略及优化：微球密码 一 实验中的那些数字

偶联微球前要选微球编号、进行偶联实验时要计数微球数量、微球加入样本孵育时要确认加入的微球数量、在 xPONENT 软件 protocol 中需要提前设定好微球数量、最终读板分析数据时也需要足够的微球数量！每个步骤好像都离不开数字，你是不是也想了解这些与微球有关的 “密码” 呢？

“Luminex 的微球有 1-500 号，究竟要选哪个号？号码会不会影响实验结果呢？连号行不行呢？”

在 xMAP^® 微球实验中，微球编号本身并不影响实验检测性能，但是号码的用意在于识别检测项目，微球一定要可被仪器识别才行。不同的仪器可识别的微球号码范围相异，依据您实验室的仪器型号，请参照下图的颜色做选择，推荐优先使用绿色的编号。

相连号码会不会使结果判读有误差是另一个大家经常关心的问题。为了数据的可靠性，除了 xMAP^® 微球的荧光有固定的配比外， xPONENT 软件亦会对读取的微球划分出有效分析的范围，所以无需担心连号问题；其实在临床 IVD 商品化的实验中，连号并不少见哦！包括 Luminex 以及 xMAP 平台上其他厂家的检测都有使用连号的微球，期刊上的发表^[1] 也能看到使用相连号码的微球实验开发，所以可以安心选号咯。

43 种序列分别偶联在相应的微球编号上进行检测^[1] 

如同前期微球偶联是怎么发生的文章中提到，在偶联的实验中，建议尝试用不同配比的微球与捕获分子，以确保得到最强信号的反应比例。那么一旦确定合适的偶联配比后，就可以批量地进行微球偶联，毕竟微球偶联后的稳定性还是很好的! 

偶联实验时的操作，除了参考已发表的文献，也可以依照 Cookbook 上的步骤进行。而针对不同规模的偶联实验，Cookbook 也给出建议的投料量。

担心偶联实验的试剂准备不全？浓度配错？您的心声我们都听到了，xMAP^® Antibody Coupling Kit 帮您将蛋白偶联实验所需的试剂全部准备好了（当然，要偶联到微球上的蛋白还是需要自己准备好的哦），只需依照说明书的操作，即可完成偶联实验。

虽然试剂盒名字取为 “抗体”偶联试剂盒，但是偶联抗原也是妥妥的，扫一扫二维码，查看更多关于蛋白偶联试剂盒的信息。

“需要使用多少颗微球才能获取准确的实验结果？”

在 xPONENT 软件的 Protocol 设置中，有一个栏位 ”Count” 的设定就是关于分析数据时要求的微球最低数量。

一般设置 50-100 颗就足以获取可靠的结果^[2]，部分（未发表）的研究更指出 35 颗微球即可获得有效的结果；在已发表的研究中更有降低到 30 颗微球甚至以下的数量，测试结果并无显著差异^[3]。所以在进行足够的验证测试下，是可以根据检测的结果，于不影响数据准确性的前提下，降低微球的数量。  

一般使用 2500 颗微球/每靶标/每孔进行实验，但是根据不同的实验，在 Cookbook 中，建议使用 2000-5000 颗微球/每靶标/每孔进行测试。

带有清洗步骤的实验，因为实验清洗过程中有微球的损失，加入的微球数要有安全缓冲量，避免损耗致使微球数量不足，出现如下错误提示：

“每个孔每靶标需要加 2000 颗微球，而测试时才用 50 颗，那是不是有大量的磁珠浪费掉了？”

这个问题与前面软件设置基本是息息相关的，假如与样本孵育时并未加入足够的微球，那么在最终上机读板时，就可能出现达不到要求微球数量的报错提示，导致结果无效。另一方面，则可于软件设置时，增加数据分析微球要求数量（软件默认设置数量为 50 颗或是 100 颗，数字可以自行调整，使用更多微球数据给出荧光值结果），以最大化使用所获取之荧光信号。