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复旦大学团队最新NC!在可穿戴微针上使用基于四面体纳米结构的NgAgo对超痕量核酸进行长期监测

复旦大学团队最新NC!在可穿戴微针上使用基于四面体纳米结构的NgAgo对超痕量核酸进行长期监测 i米立
2024-03-27
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导读:0102图:复旦大学使用可穿戴设备实时和连续监测核酸生物标志物在个人健康管理方面具有潜力,尤其是在大流行监测或

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图:复旦大学

使用可穿戴设备实时和连续监测核酸生物标志物在个人健康管理方面具有潜力,尤其是在大流行监测或重症监护病房疾病的背景下。然而,实现高灵敏度和长期稳定性仍然具有挑战性。

针对以上问题,复旦大学化学系与生物医学研究所两位教授于2024年3月2日在Nature Communication上发表题为Long-term monitoring of ultratrace nucleic acids using tetrahedral nanostructure-based NgAgo on wearable microneedles 的研究性论文。团队报道了一种基于四面体纳米结构的格雷戈里钠杆菌 Argonaute (NgAgo),用于长期稳定监测体内超痕量未扩增核酸(游离 DNA 和 RNA)在可穿戴设备上的败血症。这种集成的无线可穿戴设备由柔性电路板、微针生物传感器和具有富集能力的可拉伸表皮贴片组成。


研究设计背景

1.1 基于核酸的基因检测技术

PCR4、等温核酸扩增与CRISPR技术相结合和全基因组测序在过去几十年中,已经过优化并具有提供指示多种病理的生理信息的能力。但PCR和基因组测序仍面临局限性,例如周转时间长和设备笨重。一些基于无扩增策略的方法学被迅速开发出来,用于检测未扩增的靶核酸,包括多个CRISPR效应子、级联CRISPR反应,适配体连接的石墨烯场效应晶体管。这些新方法虽然可以解决传统核酸分子诊断的局限性,但在某些情况下,无扩增方法需要免提、灵敏、连续的监测,这可以通过完全集成的可穿戴技术来实现。

1.2 可穿戴技术

新兴的可穿戴技术为连续和同时监测人类表皮上的各种生物标志物提供了实质性的变革性技术,这扩大了它们在个性化医疗、医疗物联网和实时疾病诊断领域的应用。最先进的可穿戴设备因其监测受试者生理信息的能力而备受关注。其中一些已经在商业市场上用于血糖、体内水分流失和汗液电解质监测。因此,可穿戴设备可能为持续监测提供另一种方法,例如,患有脓毒症的重症监护病房(ICU)患者。然而,当前版本的可穿戴设备几乎不适用于ICU 场景,因为它在实时和长期监测低丰度疾病相关游离 DNA(cfDNA)或RNA生物标志物方面仍然存在一些局限性,平均约为每毫升10至15 ng。

1.3 本文研究内容

在这项研究中,作者报道了基于四面体DNA纳米结构(TDN)原核Argonaute技术的全集成可穿戴电子设备,用于EBV、金黄色葡萄球菌(SA)和铜绿假单胞菌(PA)引起的通用核酸实时监测和败血症相关干预。无线可穿戴系统由柔性电路板、工程微针和可拉伸表皮贴片组成。TDN支架用于实现超灵敏检测,而由单链DNA引导的工程化格雷戈里Natronobacterium gregoryi Argonaute(NgAgo)生物识别界面促进了系统的长期稳定性。集成可穿戴系统用于实时跟踪间质液(ISF)中与脓毒症相关的cfDNA和RNA,从而扩大了监测ICU发作脓毒症的可能性。


研究结果分析

2.1 完全集成的可穿戴电子器件的设计、组装和机制

基于原核Argonaute技术(Natronobacterium gregoryi Argonaute,NgAgo)和TDN,设计了一种具有高灵敏度和稳定性的可穿戴系统,该系统能用于长期实时监测超痕量核酸,包括DNA和RNA


2.2 TDNs在表面生物传感中的性能与机理

以TDN为载体,在石墨烯修饰的MN贴片表面形成分子识别复合物。结果发现NgAgo-gDNA复合物的高度有助于产生不同的电信号。


2.3用于核酸的工程DNA引导NgAgo系统的设计和验证

通过表面等离子体共振(SPR)测试和电化学生物传感器测试发现工程化的NgAgo-gDNA以高亲和力与靶核酸结合。


2.4 TDN-Ng MNs的体外评价

TDN-Ng MN平台在体外可用于监测纵向核酸,包括DNA和RNA。


2.5 使用集成 MN 进行体内监测的性能和评估

接下来,进一步验证了TDN-Ng MNs在体内对核酸的实时监测。结果发现,TDN-MN装置在体内靶向核酸灵敏检测中具有长期稳定性,且能够实时监测脓毒症动物模型炎性细胞因子


全文总结

本研究提出了一种无线集成的可穿戴电子设备,用于通过工程生物传感接口实时监测脓毒症相关动物模型的纵向核酸。基于TDN和Ng系统的协同效应,该可穿戴系统能够连续跟踪体内游离DNA和RNA靶标的动态变化,灵敏度为0.3 fM,体内17天内稳定性可靠。

本文还讨论了TDN-17在空间高度下对TDN-Ng系统灵敏度增强和实时监测动态平衡的机制。目前这项工作的无扩增策略代表了基于核酸的可穿戴设备的飞跃,并加速了用于ICU医疗保健管理的下一代生物传感器的出现。

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