在实验的过程中，通常会透过封闭（blocking），减少非特异性结合，降低背景噪讯，今天要跟大家介绍适合用于微球实验的封闭剂有那些！
传统 ELISA 实验中使用的封闭剂包括 BSA，鱼皮明胶（fish-skin gelatin），猪胶原蛋白（porcine collagen），酪蛋白（casein），脱脂牛奶（skim milk），马血清，山羊血清等等，但是这些成分是不是都适用于微球实验呢？有没有其他推荐的封闭剂呢？
BSA 是微球实验中最常使用的封闭剂，根据在 cookbook 中的介绍，大家可以发现 BSA 出现在多种不同步骤的缓冲液成分之中，是目前使用率最高的封闭剂之一（详情可以参考 cookbook 附录 A xMAP 常用缓冲液[1]）。
除了 BSA 外，可以选择其他种类的白蛋白（如猪、山羊等）、酪蛋白（casein）、ChemiBLOCKER™、StabilGuard®、Prionex®、鱼或猪胶原蛋白等 [1]。
SeroMAP™ 微球为表面具羧基化的非磁性微球，目前提供有 100 种不同的微球编号选择（1-100 号）。这是一款针对血清实验开发的特殊微球，经过配方优化后可减少非特异性结合造成的背景噪讯。
在已发表的实验结果中，对比一般微球与优化过的 SeroMAP™ 微球，均指出使用 SeroMAP™ 微球大幅降低非特异性信号 [2-3]。
SeroMAP 微球可降低噪讯[2]
在缓冲液中叠加不同封闭剂，不同降低噪讯的成分，是不是能使得背景信号降得更低呢？
免疫球蛋白抑制剂（immunoglobulin-inhibiting reagent，IIR）可用于去除嗜异性抗体，而吐温 20（Tween 20）则经常添加于缓冲液中起到封闭去污的作用。只是这些理论上有效的成分，不一定适合每一种实验，最好的配方都是需要经过实验数据的验证。
下图为文献中选取不同血清样本，比较叠加不同成分的降噪效果，有些具加成效果，有些则有干扰效果 [2]。
以下罗搜部分使用 BSA 以外成分封闭剂的文献提供大家作为参考
· Casein
1. Development of a multiplex Luminex assay for detecting swine antibodies to structural and nonstructural proteins of foot-and-mouth disease virus in Taiwan, J Microbiol Immunol Infect. 2016 Apr;49(2):196-207.
1. Elimination of false-positive results in a Luminex assay for pneumococcal antibodies, Clin Vaccine Immunol 2010 Jan;17(1):185-9.
2. A Multiplex Microsphere-Based Immunoassay Increases the Sensitivity of SIV-Specific Antibody Detection in Serum Samples and Mucosal Specimens Collected from Rhesus Macaques Infected with SIVmac239, Biores Open Access. 2013 Jun;2(3):171-8.
3. Opportunities for bead-based multiplex assays in veterinary diagnostic laboratories, J Vet Diagn Invest. 2013 Nov;25(6):671-91.
4. Novel polysaccharide-protein conjugates provide an immunogenic 13-valent pneumococcal conjugate vaccine for S. pneumoniae, Synth Syst Biotechnol. 2017 Jan 20;2(1):49-58.
1. Suppression of non-specific binding inserological Luminex assays, J Immunol Methods. 2006 Feb 20;309(1-2):200-4.
2. Development of simultaneous detection of total prostate-specific antigen (tPSA) and free PSA with rapid bead-based immunoassay, J Clin Lab Anal. 2011;25(1):37-42.
3. From Multiplex Serology to Serolomics-A Novel Approach to the Antibody Response against the SARS-CoV-2 Proteome, Viruses. 2021 Apr 24;13(5):749.
选用合适的封闭剂，可以有效降低实验中非特异性的讯号，使检测方法更灵敏专一!
参考文献
[1] Angeloni, et al. "xMAP Cookbook." 4 th Edit.
[2] Jerry W. Pickering, et al. "Elimination of false-positive results in a luminex assay for pneumococcal antibodies." Clin Vaccine Immunol 2010 Jan;17(1):185-9.
[3] Tim Waterboer, et al. "Suppression of non-specific binding in serological Luminex assays." J Immunol Methods. 2006 Feb 20;309(1-2):200-4.
下载 Cookbook
了解更多关于 xMAP® 的实验策略及优化!
路明克斯贸易（上海）有限公司
Luminex Trading (Shanghai) Company Limited
地址：上海市闵行区陈行路2388号7幢14C及14D室
邮编：201114
电话：+86.21.8036.9888
传真：+86.21.8036.9899
E-mail: infocn@luminexcorp.com
www.luminexcorp.com
技术支持热线：400 996 2655
©2021 Luminex Corporation. All rights reserved. Luminex and xMAP are trademarks of Luminex Corporation, registered in the U.S. and other countries.
