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多重检测平台在食物过敏的应用

多重检测平台在食物过敏的应用 路明克斯
2021-12-10
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过敏似乎已经成为现代人日常生活的一部分,导致过敏症状的原因五花八门,其中由食物引发的过敏不在少数,但是食物中可以诱发过敏症状的成分繁多,要如何快速找到真正的致敏原?哎呀~交给具备高通量筛查能力的 Luminex 多重检测平台正好! 





食物过敏

现今社会中,对于食物过敏的人越来越多,根据国内外的统计调查,人群中约有一成具食物过敏现象[1-4]轻微症状可能造成身体不适,严重者甚至危及性命,而最有效的医疗建议就是控制饮食。

对于有食物过敏症状的人,经由过敏原鉴定检测,可以了解自身的摄食选择;另一方面则透过对食物中可能的过敏原进行标示,以提防食物过敏者接触引发过敏的食物




食物过敏比想象中更复杂

目前常见被要求标示的主要致敏成分为:牛奶、鸡蛋、鱼、甲壳类、坚果、花生、小麦、大豆,然而可致敏的食物远不仅于此;此外,对多种食物过敏的现象极为普遍,仅是针对单一种分析靶标的检测法 (例如: ELISA) 无法有效满足使用上的需求, 加上部分过敏原间具有同源性蛋白,检测时可能因为交叉反应引起假阳性结果

此外,许多食物在日常饮食可以存在多种不同发酵、烘焙、加工及料理的形式,混合添加于不同的成分中,更是提高检测时的难度及复杂度[5] 举例来说:对鲜奶过敏的人,可能对发酵过的牛奶如酸奶或是奶酪也产生过敏,但是食用添加牛奶的烘焙食物如松饼及蛋糕却没有问题[6] 。又例如芝麻在食物中的使用同时可以生食烘烤榨油,但是抗原性表现不同,最好有多组联检以确保检测可靠性[7] 




多重致敏原检测法

来自美国食品药品监督管理局实验室的研究人员,与 Luminex 合作伙伴 Radix BioSolutions 联手开发了一种基于 xMAP® 微球的多重检测,他们在磁珠的表面偶联抗体,用以侦检食物中可能存在的过敏原,可以同时对 14 种食物过敏原麸质和芝麻进行检测[7-13] 

xMAP® FADA 食物过敏原多重检测法[10] 


他们在文章中提及,过去对于食物中的过敏原分析,多数依靠 ELISA 方法,少数基于 PCR 的检测试剂,虽然灵敏度高且特异性不错,但是痛点在于需要对每种过敏原一一做测试。质谱法虽然能达成同时对多种过敏原进行检测的目标,但是质谱设备不但昂贵,还需倚靠具高度技巧的分析员及多年经验以达成定量分析[13] 原文:“However, mass spectrometry requires expensive equipment, highly trained analysts, and several years before a quantitative approach can be achieved.“)  使用 xMAP® 微球法,在毋需增添许多资源的情况下,便能够同时对多种的致敏原进行定量检测;此外,微球平台的高灵活性,使得实验室可以轻易地在已建立的多重测试中,加入其他靶标扩充检测范围[9] 。 

由于食物种类及致敏原抗原表现的不同,在他们建立的方法中,对于食物样本成分有缓冲液提取及还原变性提取等不同方案[7-13] 。此外,检测食物盲样时,对其中的致敏原种类、浓度、加工过程的复杂度均未知,针对单种致敏原,使用多种不同的抗体进行鉴定,不仅能将检测灵敏度最大化,还可以因为微球检测的多重性,生成检测样本的抗原谱,再将所获取的抗原谱与标准品做比对,以识别过敏原种类并定量浓度[9] 。 


 xMAP® 聚类分析比较过敏原的多抗原谱[9] 

他们的实验选用了松饼/米饼/黑巧克力/煎饼/肉肠/橙汁等不同食品种类,并且透过对比不同操作人员、分析仪款式、不同实验室间的检测结果,确认所建立的多重检测法具有效性及稳定性[7,9,10] 





总结


  • 准确的食物致敏原评估及检测,对食品制造业及临床医疗均很重要

  • 基于 xMAP® 微球技术的检测法,大幅提升对于食物中过敏原的诊断能力及范围





考文献

[1] The prevalence, severity, and distribution of childhood food allergy in the United States. Gupta RS, et al. Pediatrics. 2011;128:E9–E17. 4
[2] Ten-year review reveals changing trends and severity of allergic reactions to nuts and other foods.  Johnson J, et al.  Acta Paediatr. 2014;103:862–7.

[3] Food allergy: a review and update on epidemiology, pathogenesis, diagnosis, prevention, and management. Sicherer SH, et al. J Allergy Clin Immunol. 2018;141:41–58.

[4] Preliminary survey on status of food allergy in young Chinese students. Lv, et al. Chinese Journal of Food Hygiene. 2005

[5] Presence of undeclared food allergens in cumin: the need for multiplex methods. Garber EAE, et al. J Agric Food Chem. 2016;64:1202–11.

[6] A new luminex-based peptide assay to identify reactivity to baked, fermented and whole milk. Sackesen C, et al. Allergy. 2019 Feb;74(2):327-336

[7] Extension of xMAP food allergen detection assay to include sesame. Cho CY, et al. J Food Prot. 2020 Jan;83(1):129-135. 

[8] Robustness testing of the xMAP food allergen detection assay: a multiplex assay for the simultaneous detection of food allergens. Rallabhandi P, et al. J Food Prot. 2020 Jun 1;83(6):1050-1056. 

[9] Multi-laboratory validation of the xMAP-food allergen detection assay: a multiplex, antibody-based assay for the simultaneousdetection of food allergens. Garber EAE, et al. PLoS One. 2020 Jul 9;15(7):e0234899. 

[10] Single-laboratory validation of the multiplex xMAP food allergen detection assay with incurred food samples. Nowatzke WL, et al. J Agric Food Chem. 2019 Jan 9;67(1):484-498. 

[11] Cross-reactivity by botanicals used in dietary supplements and spices using the multiplex xMAP food allergen detection assay (xMAP FADA). Pedersen RO, et al. Anal Bioanal Chem. 2018 Sep;410(23):5791-5806. 

[12] Cross-reactivity profiles of legumes and tree nuts using the xMAP multiplex food allergen detection assay. Cho CY, et al. Anal Bioanal Chem. 2017 Oct;409(25):5999-6014. 

[13] Multiplex detection of food allergens and gluten. Cho CY, et al. Anal Bioanal Chem. 2015 May;407(14):4195-206. 


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Luminex公司总部位于美国奥斯汀,是全球知名的医疗科技公司之一。本号将介绍公司世界领先的液相芯片平台相关产品、先进的全自动分子生物学体外诊断产品,并提供相关技术知识、报道最新进展,构架与客户之间的桥梁。
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