微米级微球
咦
~跑题了吗?怎么开始说微球呢?
没有没有~因为要这几款仪器都是读取 xMAP 微球上的荧光信号,那么要介绍不同的仪器之前,首先还得说说微球!
MicroPlex® & MagPlex®
xMAP 微球属于微米级微球,得力于微球本身密度低、体积小、高表面积的特性,Luminex 将它们加上荧光染色编码后,便能应用于各式多重检测。
这些小球根据具顺磁性颗粒与否,可区分为不带磁性的 MicroPlex® 以及带磁性的 MagPlex® 两大类,两者除了微球粒径相异,其他特性均一致;由于磁珠的磁性利于实验过程中的操作,已逐渐成为应用中的主流趋势。


微球结构示意图[1]
分析仪检测原理

《流式原理》
应用流式原理的分析仪,与一般大家熟知的流式细胞仪相似,均使用鞘液带动样本,内部具有激光用以激发荧光;不同的是,流过检测处的不再是细胞,而是前段提到的那些微米级小球。
样本中的微球在鞘液中以单颗排列通过激光,分类激光用来激发微球中特殊的荧光染料,报告激光则用来激发实验中的报导基团;分析仪内具有相应的荧光接收部件,藉由收集微球被激发后发射出的光,换算得出微球编号及微球上的实验荧光值。
LUMINEX 200、FLEXMAP 3D 以及最新推出的 INTELLIFLEX 三款仪器均应用流式原理,无论微球是否具备磁性皆可在仪器上进行检测。

《影像学原理》
MAGPIX 是目前唯一使用影像学原理的仪器,与流式法分析微球的原理相似,但使用 LED 灯作为光源。
在 MAGPIX 内部有一个纺锤形的成像池,其后方有一磁棒,当微球被驱动液带进分析仪时,磁珠可藉由磁力被吸引停留于池内,接着以红绿光照射成像池,并以 CCD 相机拍摄照片,将拍摄下的影像叠合分析判读。红光用于激发磁珠上的特殊荧光染料,对微球编码进行识别,绿光用于激发报告基团的荧光以判断实验结果。
不带磁性的微球因无法停留于成像池中,所以此款仪器限定使用磁珠。

分析仪特点对比
使用流式原理的仪器,根据鞘流速度的设定,每秒可以读取上百至上千颗微球,适合追求速度感的实验室
,此外,流式法原理对于微球是否具备磁性不做要求,兼容性较高。
经典款的 Luminex 200 具有最多的使用者,可以识别 100 种微球;另外两种同样使用流式原理的仪器,由于硬件的提升,可以识别 500 种微球;而具备双报告激光的 INTELLIFLEX ,更能在单个微球上,透过不同的报告荧光通道,进一步增加检测靶标,提高检测效率及能力!
使用影像学原理的 MAGPIX,检测速度虽不是其强项,在检测重数上也不若流式法高,但是 50 重的通量已能满足大多数的实验需求,加上仪器维护及操作都相对简易,性价比高,MAGPIX 在科研及临床领域也收获了一大批的爱用者。


总结
参考文献
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