【柏恒科技小课堂】多重qPCR开发利器之梯度

非洲猪瘟疫情的爆发使得qPCR检测占比在动物疫病检测方向发生井喷式的增长，而新冠疫情的漫延更是让核酸检测变为世人皆知。

今天咱们就来聊聊这些疫情防疫检测试剂开发的那些事。

众所周知，PCR实验的五要素：模板、引物、4种dNTP、DNA聚合酶、和Mg2+。若是qPCR反应，还需要加入水解探针，多重检测试剂呢则需要加入多对引物和不同荧光染料标记的水解探针。

理论上这么说没错，但是呢还有但是……

几对引物扩增片段的GC比不一样咋搞（Tm值不一致）？

都在一管反应的试剂，几个通道间的扩增效率不均一，该选用哪个温度进行退火？

那只能多轮实验进行对比，分别设定不同的退火温度进行平行比较，但是（这一生之敌的俩字又双的出现了）……

qPCR仪有个很贴心的设计，优化扩增曲线，结果就是不同实验之间的纵坐标比例很有可能不一致，直白的说，就是看到的好不一定是真得好。

为什么不能像普通PCR仪那样给qPCR仪设计温度梯度功能啊？这样我就能一次实验验证不同的退火温度，同时扩增曲线在同一坐标系下进行分析。不用考虑多次实验之间反复配置试剂的误差。不用考虑多次实验之间曲线坐标系比例的不同，不用摇人……

Dang~dang~dang~dang~(此时应有聚光灯)，满足要求的qPCR仪它来啦。

柏恒科技的Q9600 Pro系列qPCR仪带有温度梯度功能，温度梯度设置一次可实现12列运行不同的梯度温度。只需在退火阶段添加“梯度”功能（见图1），设置温度处输入退火的最低温度与最高温度、偏差温度处输入退火最低温度与最高退火温度的差值，梯度温度范围可设置1-42℃（见图2）。点击设定，然后运行实验。

设置好所需梯度，实验结束后就能收获满满的数据干货，真正做到数据分析不求人，要是你也想在老师/同学眼中是个实验小能手，那还在等什么？赶快联系我们吧！

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