xMAP 实验策略及优化序列：微球稳定性- 大数跨境

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xMAP 实验策略及优化序列：微球稳定性

路明克斯

2021-01-01

导读：你可能想问系列之-微球稳定性

xMAP^®平台具有高通量及灵活性高的优势，在核酸与蛋白应用上都发挥着重要角色，但随着研究方向及检测靶标的不同，实验中的各种条件也可能会依需要进行调整，就让我们根据实验讨论经验，挑选一些出镜率比较高的问题，来跟大家解答~

既然不管进行什么实验，材料清单上肯定都少不了微球，那么我们这一系列文章就先从微球来开始说起吧!

荧光编码微球

xMAP^®微球是内部具有两种或三种精准荧光染料配比的染色聚苯乙烯微珠。

xMAP^®平台仪器以及其适配的软件，透过分析微球被光激发后发射出的独特光谱特征，可对实验管中各种微球进行识别。

通过不同荧光染料配比，获取 500 种编码的微球^[1]

荧光稳定性

微球带有荧光染色，操作与保存最好都在避光条件下，避免发生光漂白。

光漂白的微球因荧光强度改变，在光谱图上漂移出正确区域外，会致使数据无法有效判读。

微球约在曝光 2 个小时后开始漂白，并将在 4 个小时内完全漂白。由于这个时间是在微球的整个生命周期中持续累积计算，所以可以开灯进行实验，但是要速战速决，避免不必要的延时光照影响微球荧光稳定性。

发生光漂白的微球，在光谱图上往右下方偏移

偶联稳定性

经偶联后的微球，其稳定性取决于许多因素，包括固定在微球面的蛋白/核酸、缓冲液成分、无菌状态和其他存储的条件。而除了以液体的状态保存外，偶联后的微球也可以冻干状态保存。

在良好的储放状态下，偶联后的微球可以保持稳定超过一年。从文献上也能找到针对偶联蛋白或是核酸后的微球进行稳定性测试的结果^[2-5]。

偶联抗体

以抗抗体及样本验证抗体偶联微球的稳定性，Y 轴刻度代表 MFI 值，X 轴表示抗抗体/样本的使用量。保存 18 个月后的微球，在偶联验证及功能性验证中，所获取的 MFI 值并无显著改变（Luminex internal study)

偶联抗原

以血浆样本验证 9 重测定法中抗原偶联微球的稳定性，Y 轴刻度代表 MFI 值，X 轴表示微球状态。九种保存 18 个月后的微球(左)，与对应的新鲜偶联微球(右)相比，MFI 值具高度一致性^[2]。

温度稳定性

常见的疑问是冷冻保存是不是能延长微球的有效期 (冻龄的概念? )

冷冻微球并无法达到延长保质期的作用，微球的有效期仍然是以瓶身标示为准。三次以上的冻融循环会对微球造成损伤，应避免将微球冷冻保存; 如需冷冻保存，请勿放置于无霜冰箱，且建议分装多管，避免温度波动以及反覆冻融损伤微球。

总结

微球稳定性之于 xMAP^®实验的重要性，如同鱼不能离开水，没有口罩不能乘地铁。微球的最佳存放条件就是在 2-8ºC 的黑暗环境中哦！

参考文献

[1] Angeloni, et al. (2018). "xMAP Cookbook." 4 th Edit

[2] Ondigo, B. N., et al. (2019). "Comparison of non-magnetic and magnetic beads multiplex assay for assessment of Plasmodium falciparum antibodies." Peer J 7: e6120.

[3] Wong, J., et al. (2009). "Rapid detection ofantibodies in sera using multiplexed self-assembling bead arrays." J Immunol Methods 350(1-2): 171-182.

[4] McDonald, J.U., et al. (2016). "Development of a custom pentaplex sandwich immunoassayusing Protein-G coupled beads for the Luminex xMAP platform." J Immunol Methods 433: 6-16.

[5] Zheng, Y. Y., et al. (2020). "Tissue microRNAs in non-small cell lung cancer detected with a new kind of liquid bead array detection system." J Transl Med 18(1): 108.

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