微球蛋白实验一定得用单抗？
因着单克隆抗体对目标的高专一性和高亲和力，一直被视为检测应用时的"金标准"，但是获取一个合适的单克隆抗体可能所费不赀还旷日废时，此外，单抗隆抗体对于热的稳定性差，加上不同批次间可能存在的差异，催使科学家找寻其他合适的替代方案。
除了适配体（点击查看前期文章）外，同样具有成本低，合成快，易修饰，热稳定性高的肽成了实验室的另一种选择。
但是蛋白实验中，偶联时是透过赖氨酸的胺基与微球表面的羧基进行共价键结，对于短序列的肽来说，如此一来可能影响反应的有效性，想要使肽分子可以完整地呈现在微球表面，聪明的科学家想出了新的修饰解决方法！
”点击化学“ 偶联法
Matthew Coppock 和 Dimitra Stratis-Cullum 发表了一种无论肽的长短、大小、序列，都可以将其附着到染色微球上的方法 [1] 。首先在微球上偶联单臂或是多臂 PEG 连接体（linker），接着再透过"点击化学（click chemistry）"的方法，使肽与 PEG 连接体结合，取得偶联完成的微球，用于后续蛋白检测实验。
这个引入"点击化学"技术的偶联法，是利用在混合有机/水溶液中反应时间短的"点击化学"，达到将肽与微球偶联的同时，也减低微球染料浸出的机会。其优点在于可连接任意长度及序列的肽，即使是水溶性差的短肽或环肽均能适用。
"点击化学 (click chemistry)" 是 2001 年由同年的诺贝尔化学奖得主 Prof. K. B. Sharpless 所提出，概念是将两种有机小分子快速且有效的拼接在一起，使碳原子与杂原子高效形成新的键结，合成出目标产物；这项技术目前已经被广泛的应用在化学合成、医学、药物等多种领域中。
《两步法偶联》
《验证最合适连接体长度》
《比较单臂/多臂 PEG 信号差异》
总结
使用点击化学技术进行偶联
任意肽序列均适用
PEG 17 为最佳连接体长度
多臂 PEG 肽偶联的微球具有更高的结合亲和力
参考文献
[1] Matthew B. Coppock, Dimitra N. Stratis-Cullum, A universal method for the functionalization of dyed magnetic microspheres with peptides, Methods, Volume 158, 2019, Apr 1;158:12-16， doi: 10.1016/j.ymeth.2019.01.014. Epub 2019 Jan 30.
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