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WB实验解决方案之电泳与转膜

WB实验解决方案之电泳与转膜 PJKL
2018-02-27
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导读:电泳与转膜

电泳缓冲液

一般来说,在被分析的蛋白质稳定的pH范围,凡不与SDS发生相互作用的缓冲液都可以使用,但缓冲液的选择对蛋白质的分离和电泳的速度是非常关键的。

含有SDS的不连续缓冲系统可以提高分辨率,现在被广泛用于蛋白质亚基相对分质量及纯度测定,其中Tris-Gly系统是目前使用最多的缓冲系统。

相对分子质量低于15000(≤30000)的多肽在常规 Tris-HCl系统中电泳的分辨率是不够的,因为其形成的SDS多肽胶束大致为球形,而不是椭圆形,它们的长度和直径在同数量级,同时多肽内部的较多的电荷不能被结合的SDS电荷所覆盖,所以偏离了相对迁移率和相对分子质量对数的线性关系。  Tricine-SDS-PAGE通常被用来分离相对分子质量范围为1000~100000的蛋白质。对于分辨相对分子质量小于30000的蛋白质,它是优先被考虑的电泳系统。



转移缓冲液

传统转移缓冲液由缓冲系统和甲醇组成。 Towbin缓冲液(1979),一种Tris-甘氨酸缓冲液,常用于湿转系统。该缓冲液pH83,比大多数蛋白质的等电点(pl)要高。蛋白质带净负电荷并向阳极迁移。因为缓冲液在槽中混合。转移过程中离子分布相对稳定。


补充方案:转印膜(Merck Millipore

Immobilon® estern Blotting转印膜



补充方案六:宽范围蛋白markerImmunoway






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