RNA提取是分子生物学研究中最基础的实验之一，但RNA相比较DNA而言，因其易降解，经常让新手哭笑不得。
RNA易降解原因
内因：RNA因其自身特殊结构，本身不稳定，另外RNA分子2’位置上有游离的羟基，易形成2’，3’-环形磷酸盐中间产物，易分解。
外因：生物体内和外部环境中存在大量RNase，并且RNase不易失活。
炎炎夏日，何种方法能快速获取RNA呢？
Trizol是一种传统总RNA抽提试剂，内含含有酚、异硫氰酸胍和β-巯基乙醇等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。酚能使核蛋白质与核酸解聚；异硫氰酸胍是一类强力的蛋白质变性剂，使蛋白质二级结构消失，细胞结构降解，核蛋白迅速与核酸分离；β-巯基乙醇主要破坏RNase蛋白质中的二硫键。
实验准备
（RNA专用枪头、EP管、PBS、Trizol、氯仿、异丙醇、75%乙醇、DEPC水（0.1%等）
样本处理
（加入对应比例的Trizol组织液氮研磨后匀浆、培养细胞可直接收集）
（原则：确保裂解液能够彻底样本，保持溶液中核酸浓度适中）
离心后分三层：上层为水相的RNA；中层为DNA,脂类等；下层为细胞残渣，蛋白，多糖等。
04
转移水相
转移水相时，枪尖随着液面下移而下移，避免扰乱分层，慢慢吸取，避免吸到中间相和下层有机相。
加入等体积的异丙醇，混匀，静置10分钟后，4℃，12000g离心10分钟。
06
加入75%乙醇时轻轻加进去就好，避免把RNA沉淀吹散，RNA吹散后很难通过离心聚集到一起成为肉眼可见的沉淀，导致实验的失败。
07
1、国内外知名厂家试剂盒法
配制Carrier RNA与裂解液的混合液
（Carrier RNA与裂解液混合后最多保存48小时，现配现用，成本高且操作繁琐）
样本前处理
室温孵育（10分钟）
离心后加入无水乙醇
混合物过离心吸附柱
两次洗涤
室温晾干
RNA洗脱
2、博日SimplyP 系列RNA提取试剂盒
样本前处理
室温孵育（2分钟）
两次洗涤
室温晾干
RNA洗脱
7分钟快速提取
贴壁细胞RNA提取-荧光检测
RNA纯度和完整度判断
浓度检测：
OD260/OD280：1.8-2.2
OD260/OD230：1.5-2.2
① OD260/OD280 低于 1.8 表示有蛋白质的污染 ；
② OD260/OD230 低于 1.5 表明有明显的有机物如糖、肽、苯 酚等的污染。
电泳检测：
1、RNA电泳共3条条带，分别是28s、18s、5s。且第一条带（28s）亮度应为第二条（18s)亮度的约2倍。最下面一条带最淡，为5s条带。如果5s条带很亮，28s和18s不亮，说明RNA发生严重降解
2、除了观察电泳条带亮度以外，要关注条带拖尾现象，全泳道弥撒，则为存在杂质或者降解
不同方法提取ＲＮＡ优缺点对比
杭州博日科技有限公司是一家专业从事生命科学仪器和试剂研发、生产、销售及服务的企业。
仪器以及试剂种类众多，详情请咨询：0571-87774319
勤勉励志
开拓创优
感谢关注↓↓↓ 长按二维码关注我们
杭州博日科技有限公司 |http://www.bioer.com.cn