精彩回顾| AAV载体的工艺开发

近年来，全球共两款AAV基因疗法获批上市，包括治疗眼部疾病的Luxturna和靶向中枢神经系统的Zolgensma。国内在2021年上半年也接连批准了纽福斯的NR082和信致医药的BBM-H901注射液这两款AAV体内基因治疗药物进入临床，进一步推动AAV成为业界关注的焦点。

目前市场上主要的两类AAV包装系统分别是HEK293转染体系和昆虫细胞杆状病毒包装系统。HEK293系统使用三质粒直接转染HEK293细胞，周期较短，但缺点是产量低、成本高，工艺难以放大。

昆虫细胞系统产量更高、成本低、空壳率低，工艺相对容易放大，但缺点是由于增加了病毒制备过程，因此周期长，杆状病毒的不稳定性会影响工艺放大，并有VP1/2/3比例引起的感染力问题和潜在的昆虫弹状病毒问题。

孔博士同时介绍了两类AAV生产包装系统的工艺流程对比。在上游工艺中，昆虫杆状病毒细胞的步骤相较更为复杂，需要经过载体设计、杆状病毒制备、转染Sf9细胞、单噬斑筛选和鉴定、病毒扩增等步骤。除了昆虫细胞系统需要额外的除病毒工艺外，二者下游的纯化工艺基本相同，目前已经能够良好地去除空衣壳。

昆虫细胞系统有其特有的技术壁垒，包括：早期的昆虫细胞体系包装的AAV相比HEK293系统感染力低，杆状病毒的基因组不稳定，和潜在的昆虫弹状病毒问题。尽管昆虫细胞系统有较低的空壳率，但通过分子设计和工艺改善，还可以更加减少空壳病毒。孔博士介绍了目前的解决方法和未来发展方向，部分问题已经得到改善，但专利壁垒比较高。