每一位在蛋白纯化路上“肝”过的科研人，都曾与层析柱相爱相杀。在你的记忆里，是否有过这样一个平凡的实验日下午——
你满心期待地开始一次蛋白纯化实验，放好Buffer瓶，接好柱子，把离心好的样品推进loop环，点击运行精心编辑好的程序，心中默念：这次一定要拿到高纯度的蛋白！然而，现实总是骨感的。软件中，压力线一路飙升，叮，超压了，停止运行了。你心里咯噔一下，脑海里瞬间闪过无数个问号：是样品没离心干净？是Buffer放太久了？还是……柱子它，又堵了？
灵魂拷问
柱压为何飙升？柱子为何会堵？
层析柱的任何“不适”都会通过柱压反映出来。究其根源，无外乎以下几点：
颗粒物 “刺客”
这是常见的柱压升高的“凶手”！样品虽然经过离心，但可能还有些漏网之鱼，如微小的细胞碎片、蛋白沉淀、核酸等。它们悄无声息地潜入柱子，在入口筛板或填料顶端安营扎寨，堵塞流路。
蛋白 “强盗”
某些蛋白特别“黏人”（比如疏水蛋白、蛋白聚集体等），它们没有按预期与填料结合-洗脱，而是死死吸附在填料上，经年累月，形成顽固的污垢。此外，样品中的脂质、核酸等杂质也会共同形成难以去除的沉积物，导致柱压升高。
微生物 “拆迁队”
如果你的缓冲液保存不当或系统长期未清洗，微生物和细菌就会在里面快乐地繁殖。它们形成的菌膜和代谢产物，是层析柱堵塞和污染的另一大来源。
“气泡” 杀手
系统中有气泡，尤其是进入柱床后，会破坏液体流动的均一性，导致柱压异常升高和峰形畸变。
物理 “内伤”
柱床发生干裂或是被意外压塌……这些物理损伤往往是不可逆的，会直接导致柱效下降和柱压升高。
知道了原因，我们就可以对症下药了！
防患于未然
层析柱的养生之道
正确清洗：给柱子做一次深度保养
定期的在位清洗（CIP）是维持层析柱性能和寿命的重中之重。
应对蛋白杂质： 使用不同浓度NaOH溶液清洗1-2个柱体积（注意填料的pH耐受范围），NaOH是强效的清洁剂，能有效溶解变性蛋白。
应对脂质、疏水结合蛋白或脂蛋白杂质： 可用70%乙醇，30%异丙醇或是含去垢剂的碱性或酸性溶液清洗。
应对沉淀蛋白： 可用8 M尿素，6 M盐酸胍或胃蛋白酶进行清洗。
无论使用哪种清洗剂，清洗后都需要用大量的水和缓冲液充分平衡柱子，否则不仅起不到清洗效果，反而会对柱子造成二次伤害。
正确储存：让柱子安心睡个好觉
长期储存不当，是对层析柱的“慢性谋杀”。储存时，层析柱先用蒸馏水清洗，再用20%乙醇清洗。对于使用SP和S配基的阳离子交换层析柱，需要在 20%的乙醇溶液中加入0.2 M乙酸钠。对乙醇/水混合溶液进行彻底脱气，并以低流速充入柱中，以避免层析柱超压。
短期储存，清洗后，用存储溶液（如20%乙醇）冲洗整个系统，确保柱子内外都充满存储液，避免蒸发。长期储存，如放假这种几周以上不用柱子的情况，务必将柱子从仪器上拆下，两端拧紧密封堵头。按照说明书推荐的温度，妥善放置。
正确连接：与气泡杀手说拜拜
连接柱子是第一步，也是相当容易出问题的一步。
连接时，要确保所有流路中的气泡都已排尽。在有流速的前提下，将层析柱接入系统，先将柱上端的管路与柱子入口连接，但不要拧紧，松开柱子下端堵头，拧紧上端，看到液体从下端接口处均匀流出且无气泡时，迅速拧紧下端管路接头。
观察柱压和基线是否平稳，柱压平稳说明无气泡，如果柱压规律的上下波动，就说明柱子进气了，则需要大量的缓冲液冲洗排气。
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祝大家实验顺利
柱压平稳，Paper多多！