在使用ÄKTA纯化仪器进行纯化实验时，常常会遇到层析系统压力突然升高的“紧急状况”。很多同学看到压力升高第一反应往往是“层析柱堵了”，赶紧去进行反向清洗。实际上，压力升高≠层析柱堵塞，盲目冲柱不仅解决不了问题，还可能造成层析柱和填料的损伤。先别忙着冲柱，找到正确的原因可以更快解决问题！
Part.1
ÄKTA设备包含多个压力传感器，分别位于系统泵后，样品泵后以及集成在柱位阀的柱前和柱后压力传感器。根据设备模块选配差异，可以同时检测或者检测其中几项。
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系统泵后压力传感器
可以实时监测系统泵产生的系统压力，可以通过Unicorn软件的System pressure查看数值。所有的仪器都会检测System pressure，25型号系统最大耐压是20MPa，150型号系统最大耐压是5MPa；
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样品泵后压力传感器
可以实时监测样品泵产生的系统压力，可以通过Unicorn软件的Sample pressure查看数值。配置了样品泵的仪器可以进行检测；
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柱前和柱后压力传感器
可以实时监测层析柱柱前和柱后压力，并通过计算得出柱前柱后压力差Delta C pressure (Delta Column Pressure)。分别可以通过Unicorn软件的Pre-column pressure，Post-column pressure和Delta column pressure查看数值。配置了柱压差模块或者多柱位阀的仪器可以进行检测；柱前压代表层析柱硬件受到的压力，而Delta压代表层析柱中层析填料受到的压力。
设备压力示意图
Part.2
当我们使用层析柱进行层析实验时，将层析柱连接到仪器之前，需要先在系统中设置对应的报警压，保证层析柱在使用过程中受到的压力不超过最大耐压，以防损伤层析柱和填料；
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查看层析柱的最大耐压有两种方式
（1）可以在说明书上查看层析柱耐压
在说明书上的column data中，可以查看层析柱的最大耐压。Column hardware pressure limit对应PreC pressure，Typical pressure drop over packed bed对应DeltaC pressure。
（2）可以在Unicorn软件中的Column Handling中查看层析柱具体参数
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如何设置层析柱的报警压
（1）如果仪器可以检测柱前压和柱后压，则按照层析柱的柱前压和Delta压分别在Unicorn软件中设置Alarm pre Column Pressure和Alarm delta Column Pressure；
（2）如果仪器只能检测系统压力，则需要设置Alarm pre column pressure，设置方法如下：使用管道代替层析柱连接仪器和反压阀在线的情况下，使用层析柱工作流速，测得系统压（空载压力）P1，比较层析柱的最大Delta耐压+ P1与最大柱前压耐压的数值，设置较小的（更保险的）数值作为最终柱前报警压即可；
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如果层析柱超压怎样处理？
（1）检查系统报警压设置是否正确
当层析柱显示超压时，应首先检查系统报警压设置是否正确。在设置柱前压报警压时，有时我们往往会忽略限流器产生的反压。限流器，也叫做反压阀，提供0.2MPa的反压，防止流路中气泡产生。因此，限流器在线的情况下，不连接层析柱时，Pre-column pressure会显示为0.2MPa，因此在设置柱前报警压时，应设置为系统空载压力（不连柱子时的系统压力，通常为反压阀的压力0.2MPa）+层析柱最大Delta耐压。
连接在pH阀上的限流器
（2）判断超压是由系统还是层析柱产生
首先需要确认在流速为0的情况下，各个压力传感器是否为0，如果显示有压力，则需先对各压力传感器进行校正。
压力传感器在流速为0下显示正常，则需确定超压是由系统还是层析柱产生：
先用管道代替层析柱或将层析柱bypass，如果压力仍偏大（0.2 ± 0.05 MPa），可依次检查：
在线滤器是否堵塞，使用去离子水或者NaOH超声清洗滤膜，如有必要时可更换在线滤膜；
反压阀是否超压需要清洗；将FR-902两端的接头拧下，取下FR-902后直接浸泡在0.5M NaOH中，超声20min；
检查系统管路是否堵塞或弯折；
对系统进行清洗，使用1 M NaOH进行System Wash清洗，立即用0.5 M NaCl和去离子水将NaOH冲洗干净并使系统pH保持中性。
（3）如果不连接层析柱时压力恢复正常，则大概率是层析柱堵塞，此时应按照说明书上CIP的步骤对层析柱进行清洗。
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