Western Blot 中的“关键一步”漂洗
在 Western Blot 实验中，我们常常关注抗体孵育、蛋白上样这些环节，却容易忽略一个看似简单但非常重要的步骤——漂洗。 今天我们就来聊聊这个“不起眼”的漂洗步骤，为什么它如此重要？
漂洗，远不止“冲一冲”那么简单
缓冲液是基础：常用的 TBST（Tris - HCl 缓冲液 + NaCl + Tween - 20）和 PBST（PBS 缓冲液 + Tween - 20），就像漂洗的“魔法药水”。Tween - 20 这个表面活性剂，能巧妙地破坏抗体与膜表面的非共价结合，让游离抗体乖乖“离场”。
洗掉谁？洗多少？
漂洗的核心任务是移除未结合的一抗/二抗、封闭剂残留，同时保护特异性结合。洗过头，信号可能被洗掉；洗不够，背景必然脏乱差。
时长 & 次数： 没有绝对标准！一抗后和二抗后的漂洗要求不同（二抗后通常需更充分）。常见操作：每次5-10分钟，重复3-4次。关键：轻柔晃动！剧烈震荡可能损伤膜或洗脱目标蛋白。
温度有影响：室温最常用。若背景顽固，可尝试4°C延长漂洗，但需注意信号强度可能减弱。
常见漂洗翻车现场
背景深似海：多半是漂洗不彻底（次数少、时间短、缓冲液失效、晃动不足）。
信号弱如丝：可能漂洗过度（时间太长、次数太多、吐温浓度过高、过于剧烈）。
膜上现“花纹”：漂洗不均匀（膜堆叠、未完全浸没、摇床不平）。
洗出SCI级结果的秘诀
1. 充分浸润：确保膜完全浸没在缓冲液中，避免膜相互粘连。
2. 温柔摇摆：使用摇床，保持轻柔、持续的晃动。
3. 时间灵活调整：根据背景情况微调每次漂洗时长和总次数。背景脏？适当增加一次或延长单次时间（先小范围试）。
4. 滤纸吸干：漂洗结束，用干净滤纸轻轻吸去膜上多余液体（勿擦拭！），再进行下一步。
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| 货号 | 品名 | 规格 |
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| R20861 | PBS磷酸盐缓冲液 | 20×,pH7.2-7.4 |
| R26021 | PBS磷酸盐缓冲液 | 0.01mol/L,pH7.2 |
| R26022 | PBS磷酸盐缓冲液 | 0.01mol/L,pH7.4 |
| R20863 | PBST | 1×,pH7.4 |
| R20864 | PBST | 10×,pH7.4 |
| R20865 | PBST | 1×,pH7.5 |
| R20866 | PBST | 10×,pH7.5 |
| R32011 | 1×TBST缓冲液（粉剂） | / |
| R32024 | 10×TBST缓冲液（粉剂） | / |
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| R32526 | TBS/Tween缓冲液速溶颗粒 | / |
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| R32528 | TBSTx (10X) (TBS with Triton X-100, 10X) |
/ |
| R32529 | TBSTx (TBS with Triton X-100) | / |
| R32530 | TBS缓冲液(即用型干粉) | / |
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| R21301 | Western blot二抗稀释液 | / |
| R32578 | Western Blot一抗二抗洗脱液 | / |
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2025-05-30
