一、简介
DNA G-四链体（G4s）是由富含鸟嘌呤的序列形成的非典型核酸结构，其由四股螺旋组成，通过鸟嘌呤四联体和单价阳离子（例如K⁺）稳定。G-四链体在转录调控、端粒维持和基因组稳定性等关键生物过程中发挥着重要作用。由于与癌症和神经退行性疾病等疾病的紧密关联性，G-四链体受到了广泛关注。
二、技术原理
G4 Cut&Tag是一种尖端的基因组分析技术，旨在以高分辨率和特异性绘制DNA G-四链体（G4）结构。该方法整合了G4特异性抗体、pA-Tn5转座酶融合体以及原位捕获。G4特异性抗体BG4能够特异性结合到轻度通透化细胞内的天然G4结构，从而保持其体内构象。将一个Protein A/G-Tn5转座酶复合体连接到抗体上，该复合体在Mg²⁺激活后，会在G4位点附近的DNA处进行切割，同时插入测序接头。与ChIP-seq不同，G4 CUT&Tag绕过了染色质片段化（超声处理）、交联和免疫沉淀步骤，从而将背景噪声和信号丢失降至最低。数谱生物G4 Cut&Tag 服务使用Arraystar公司开发的G4 CUT&Tag Library Prep Kit试剂盒进行建库，保证了实验的高质量和高效率。
图1. G4 Cut&Tag工作原理示意图。
样本需求：细胞数目 > 5x105个；组织 > 200mg。
物种：有基因组信息。
三、实验流程
1．细胞准备：将组织或细胞样品制成细胞悬液并检查细胞活力；
2．G4结合一抗BG4；
3．BG4结合二抗；
4．ProteinA-Tn5融合蛋白结合并片段化DNA，同时加接头；
5．纯化DNA片段，构建文库；
6．上机测序，进行数据分析；
7．提供结果报告。
四、技术优势
1．天然G4结构捕获技术：相比传统方法，它能捕获更多保留其体内天然构象的G4结构。这是因为传统ChIP-seq技术中染色质片段化时的剪切力及其他去垢剂，往往会破坏G4结构或使其变形。
2．分辨率更佳：相较于传统G4 ChIP-seq技术，能检测到更多G4峰。
3．高灵敏度：通过更低的背景噪声与更高的信噪比，实现精准定位。
4．流程高效：文库制备可在24小时内完成。
5．样本量要求低：适用于稀有样本分析。
五、测序结果展示
1. Cut&tag富集peak检出结果表格
2.Cut&tag鉴定到的差异peak表格
3.Cut&tag差异peak的火山图、相关基因的GO和KEGG富集分析
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