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液相色谱柱规格参数(二)

液相色谱柱规格参数(二) 北京川弗科技有限公司
2024-09-14
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上一期我们介绍了液相色谱柱的基本规格,在选择色谱柱的时候我们还需要考虑以下参数。


pH耐受范围

普通的C18色谱柱pH耐受范围通常为2-8,当流动相的pH<2时,键合相会从基质上脱落,即我们通常说的键合相流失;当流动相的pH>8时,硅胶基质开始溶解,即我们通常说的填料塌陷。

为了解决色谱柱在强酸和碱性条件下的使用寿命问题,各个品牌都有自己特有的技术,比如Waters Xbridge系列,采用亚乙基桥杂化硅胶键合技术和三键键合技术,将色谱柱的pH耐受范围扩展到1-12。



最高压力

每根色谱柱都有最高压力限制,超过这个压力,会对色谱柱造成不可逆的伤害。HPLC色谱柱一般的耐压在400bar(6000psi)或者276bar(4000psi),收到新色谱柱一定要注意这个压力限度;

即使没有超过压力限度,也不要长时间在接近最高限度附近的压力下使用,会缩短色谱柱寿命


封尾/封端

对于硅胶基质的填料,硅胶表面充满了游离硅醇基Si-OH,Si-OH电离后形成硅氧负离子,这对于碱性化合物的分析是很不友好的,通常会造成碱性化合物的拖尾;通常会选择用短碳链(如三甲基硅烷TMS)键合游离的硅羟基,这种操作就被称为封尾/封端。


由于空间位阻效应,即使进行了多次封尾操作,也还是会存在游离的Si-OH,对于碱性很强的化合物,仍然存在色谱峰拖尾的现象;各个品牌也有自己的特殊技术解决这个问题,如Waters 的 Xselect CSH系列和CORTECS C18+色谱柱,在(杂化)硅胶表面键合了一层正电荷,屏蔽了活性较高的Si-OH,不用TFA,仅仅使用甲酸即可解决峰形拖尾的问题,是一款对质谱更为友好的色谱柱。


碳载量

碳载量就是填料中碳的含量,对于反相色谱柱来说,碳载量是一个重要的参数,显示着色谱柱的保留能力,一般来说,碳载量越大,色谱柱的疏水作用能力越强,对物质的保留越强。


最高温度

温度过高,会缩短色谱柱的寿命,一般使用温度都在40度以下,对于一些特殊的项目,如蛋白,肽,寡核苷酸,温度通常在60℃甚至90℃,这种可以选择如Waters BEH 杂化硅胶系列,对于温度的耐受性较好。


全多孔 vs 核壳

相较于全多孔颗粒填充的色谱柱,实心核颗粒色谱柱展现了更高的柱效和更低的柱背压。带来了分析速度以及柱效方面的提升

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