▸称量：称取适量混合均匀的试样(精确至0.001g)，根据标示含量使所取试样中褪黑素含量约为1.5mg，置于15mL刻度离心管中；
▸提取：加入70%乙醇溶液8mL，涡旋混合10min，待净化；
▸净化：将8mL样液全部上样过柱，收集流出液；2mL 70%乙醇溶液冲洗刻度离心管，将洗液一并转入小柱中，待流尽抽干。
▸定容：取合并混匀后的滤液2mL于10mL棕色容量瓶中，以流动相定容，混匀，经PTFE滤膜过滤，待测。
▸色谱柱：Kinetex 5µm C18 100 Å, 250 x 4.6mm (P/N: 00G-4601-E0)
▸流动相：甲醇-三氟乙酸水溶液(45∶55，V/V)
▸流 速：0.8mL/min
▸柱 温：30℃
▸进样量：10μL；
▸检测波长：222nm
标准曲线
表1.褪黑素标准曲线
图1.褪黑素标准曲线图
方法准确度
实验平行6组，由表2可得，褪黑素软胶囊样品回收率≥90%，RSD＜1%
表2.褪黑素软胶囊样品实验结果
实验谱图
图2.褪黑素胶囊样品色谱图（理论浓度30μg/mL）
本实验重现了GB/T 45443-2025保健食品中褪黑素的测定，使用Cleanert Fat Removal小柱结合液相色谱的检测方法对褪黑素软胶囊基质进行了测试。试样中的褪黑素经70%乙醇溶液提取，Cleanert Fat Removal固相萃取柱净化，Kinetex C18（4.6×250mm, 5μm）液相色谱柱进行检测，采用外标法定量。结果表明，添加水平的相对回收率≥90%，RSD均＜1%，能够满足检测要求。
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