还在用ELISA一次苦苦检测一个位点？PTMScan®技术结合免疫亲和富集与LC-MS质谱检测，能轻松实现对每个样本中数百至数万个PTM位点的海量分析，其检测能力远超传统方法，带您步入高通量组学分析的新纪元。
研究翻译后修饰(PTM)对于加深我们对细胞信号转导、疾病生物学和治疗机制的理解至关重要。CST的PTMScan®技术能够在每个样本中定量检测数百到数万个PTM位点，是一种强大而多功能的方法，已广泛应用于包括药物发现和表征在内的多个领域，用于识别新型生物标记物。
图1. PTMScan®技术适用于多种修饰的研究
随着药物研发样本量不断增大，传统手动操作已成为限制PTMScan®工作流程效率和重现性的瓶颈。通过将可编程自动化系统引入该流程，研究人员不仅能够显著提升实验通量和可操作性，更可获得可靠的生物学洞见。
为验证PTMScan®试剂在高通量亲和富集流程中的平台兼容性，并评估其对实验可重复性的影响，我们在几种常用的商业平台(见表1)上进行了测试。
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平台 |
兼容产品 |
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磁珠处理器平台(例如ThermoFisher的KingFisher系列)仅通过在孔板间移动磁珠来完成操作。 |
PTMScan® HS试剂盒 |
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混合平台(如Agilent的AssayMap Bravo系列)采用预装富集抗体试剂的定制化吸头，通过吸头在孔板间转移液体来实现操作。 |
不含磁珠的定制PTMScan试剂配方。了解有关CST定制试剂的更多信息。 |
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液体处理平台，例如Hamilton、Tecan、Beckman Coulter、Revvity等公司的系统。 |
PTMScan® HS试剂盒 |
表1：定量蛋白质组学的自动化平台
01
该类系统通过磁性探针快速捕获和转移磁珠，非常适合PTMScan®HS试剂的操作。实验显示，使用KingFisher Apex进行自动化泛素富集，在PTM肽段回收率方面与手动操作无显著差异，且操作更简便、更适用于大批量样本。点击链接了解详细测试条件和其他参考文献。
图2. 对比分析了PTMScan® HS泛素实验中，手动富集与KingFisher Apex机器人自动富集所产生数据的可重复性。A) 已鉴定的独特PTM肽的数量。B) 手动流程与KingFisher流程中约1000个随机选择的PTM肽的重叠情况。C) 手动流程与KingFisher流程共有PTM肽的MS1峰面积(自然对数转换)无标记定量分析。
02
与磁珠处理系统不同，混合平台使用专门的吸头(通常预装蛋白质A)，可以将经 PTMScan®验证的抗体固定在这些吸头上。在这种混合平台中，液体处理器不是将基于PTMScan®磁珠与样品溶液或洗涤缓冲液一起孵育，而是通过固定有抗体的吸头抽吸液体来完成反应，不仅兼容PTMScan®抗体，还展现出强大的灵活性。
为评估PTMScan®试剂在混合平台上的表现，我们用AssayMAP Bravo比较了三种不同抗体靶标在手动琼脂糖珠富集与吸头富集方式下的效果。实测数据显示，使用双向抽吸程序，PTM肽段鉴定数量较手动方法提升30%–135%。点击链接了解详细测试条件和其他参考文献。
图3. 此示例展示了在多种PTMScan®实验中，使用手动方法或AssayMAP Bravo机器人进行富集时所得数据的一致性与可重复性。请注意，当通过自动化平台执行工作流程时，PTM肽的回收率有所提高。
03
通过自动化完成试剂分液、混合、磁珠捕获及溶液置换，PTMScan® HS试剂盒可在此类平台(如Beckman Biomek、Hamilton Microlab)上实现稳定、高效的富集流程，显著减少人为误差。
CST的PTMScan®系列试剂盒兼容多种自动化平台，不论是通过磁珠处理器处理PTMScan® HS试剂，还是在混合平台上使用PTMScan®抗体，都能帮助研究人员在蛋白质组学研究中实现更高效、更可靠的PTM分析。
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