抗体纯化是目前生产生物制品和单抗药物的重要步骤,无论是用于单抗的纯化,还是抗体的生产,都具有广阔的应用前景,抗体产率的提升对利润的影响是很大的。
如有rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析填料用量很大的客户,我们可以根据客户的需求来定制和生产指定的规格和产品,欢迎来电来信沟通咨询。
西宝生物rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱系列产品由以下三部分组成(小鼠抗体IgG纯化为例):
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与小鼠抗体相结合的蛋白G结合填料---rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱; -
用于小鼠抗体结合于填料上的结合缓冲液--Protein G IgG Binding Buffer; -
将结合的小鼠抗体从填料上洗脱下来的洗脱缓冲液--IgG Elution buffer。
表1 Seebio Biotech生产rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱系列产品参数
特性 |
rProtein G SeePUR |
特性 |
rProtein G SeePUR |
柱体积规格 |
1mL, 2mL, 5mL, 70mL, 150mL |
填料稳定性 |
>20纯化周期 |
基质组成 |
4%高交联度琼脂糖 |
pH稳定性 |
pH 2~11 |
基质平均粒径 |
90μm |
推荐工作pH范围 |
pH 3~10 |
功能基团 |
rProtein G: 22.5 KDa; |
推荐在位清洗pH范围 |
pH 2~11 |
配基密度 |
>10mg rProtein G/mL基质 |
工作温度 |
4~40℃ |
结合能力 |
25-49mg人IgG/mL填料 |
运输条件 |
20%乙醇浸泡,室温运输 |
推荐流速 |
30~150 cm/min |
贮藏条件 |
20%乙醇条件下,4~8℃保存 |
-
产量优,纯度高
1 mL填料从人血清中单次纯化可获得大于25 mg的IgG抗体,纯度达95 %以上。
-
特异性更高,亲和性更强
本产品使用的rProtein G是通过基因工程重组蛋白的方法表达获得,重组表达的rProtein G很大程度上地去除了除Fc端以外的其他非特异性结合位点。
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操作简便、稳定、重复性佳
可直接用于从血清、腹水中纯化IgG抗体,或是用于纯化含Fc片段的重组蛋白。
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纯化效率大幅提升
采用了高配套偶联技术,使得有限的结合位点,结合更多蛋白G
Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱在小鼠腹水IgG纯化中的应用
目前,某大型生产客户采用美国某品牌的三种产品配套(包括蛋白G填料、结合缓冲液液、洗脱缓冲液),纯化其腹水B产品,产量为1.642-2.18mg/mL,使用西宝生物rProtein G SeePUR系列产品对提供的腹水B进行纯化,产量达到2.815-3.673mg/mL。
抗体生产一般受腹水种类和批次影响较大,但评估纯化产品效果一般以好的结果来衡量,上述西宝生物(2.815-3.673mg/mL)VS美国某品牌(1.642-2.18mg/mL)
证明:西宝生物纯化效率较美国同种产品有20-50%的提高!
Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱在人血清IgG纯化中的应用
美国某品牌的rProtein G Sepharose 4B亲和层析柱对人血清进行纯化(图1,Lane 4~8为IgG洗脱管),其对人IgG的结合量限度为约34 mg/mL Medium (其说明书称结合量限度>25 mg/mL Medium);
使用西宝生物rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱对人血清进行纯化(图2,Lane 6~9为IgG洗脱管),其对人IgG的结合量限度约为66 mg/mL Medium,纯化效果远远优于该同类产品。
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Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱 20141201-(1)结合兔IgG能力评估结果
评估背景:rProtein G柱是抗体纯化,特别是鼠单克隆抗体纯化的重要材料,美国某品牌生产的2mL重组蛋白G亲和层析预装柱采用兔抗体进行检测,每毫升填料的兔抗体结合量为~18mg/mL。为准确评估本公司生产的rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱,特进行下列实验:
目的:用兔IgG评估Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱20141201-(1)结合兔IgG能力
时间:2014年12月02日 |
柱填料体积:1mL |
柱填料:rProtein G Lot 20141201-(1) |
样品:兔IgG (100mg in PBS,11.3mg/mL)×9mL |
样品体积:9mL |
上样方式:上样1次 |
平衡:PBS |
Wash:PBS |
Elution:IgG Elution Buffer(pH2.8) |
计算公式:兔IgG质量(mg)=体积(mL)x 浓度(mg/mL)【浓度=稀释倍数xOD280/1.35】
管号 |
体积(mL) |
稀释倍数 |
OD280 |
浓度(mg/mL) |
质量(mg) |
1 |
2 |
1 |
0.910 |
0.674 |
1.348 |
2 |
2 |
10 |
2.556 |
18.933 |
37.867 |
3 |
2 |
5 |
0.872 |
3.230 |
6.459 |
4 |
2 |
1 |
1.584 |
1.173 |
2.347 |
5 |
2 |
1 |
1.257 |
0.931 |
1.862 |
6 |
2 |
1 |
0.000 |
0.000 |
0.000 |
总质量(mg) |
49.883 |
||||
评估结论:本公司生产的rProtein G填料,每毫升可结合49.88mg/mL 兔IgG,结合效率远远超出美国某品牌所规定的技术指标(18mg/mL),此外,操作更快速,简便!

图3 Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱
鉴于结合效率高,西宝生物rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱系列产品已被众多国内鼠单抗纯化公司长期订购。抗体的价值很高,每毫克达到200-400USD,抗体产量提高,大大提高了抗体生产公司的利润。西宝生物rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱系列产品无疑是您抗体纯化过程中低成本高产率的明智之选!
表2 Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱系列产品列表
货号 |
商品名称 |
级别规格 |
包装规格 |
SPC001 |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 |
1ml/column |
1根 |
SPC002 |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 |
2ml/column |
1根 |
SPC005 |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 |
5ml/column |
1根 |
SPC070 |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 |
70ml/column |
1根 |
SPC150 |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 |
150ml/column |
1根 |
SPC001K |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 套装(配结合/洗脱缓冲液) |
1ml rProtein G SeePUR重组蛋白G 亲和层析预装柱 (50ml Binding buffer+25 ml Elution buffer) |
1kit |
SPC002K |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 套装(配结合/洗脱缓冲液) |
2ml rProtein G SeePUR重组蛋白G 亲和层析预装柱 (100ml Binding buffer+50 ml Elution buffer) |
1kit |
SPC005K |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 套装(配结合/洗脱缓冲液) |
5ml rProtein G SeePUR重组蛋白G 亲和层析预装柱 (300ml Binding buffer+125 ml Elution buffer) |
1kit |
SPC070K |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G 亲和层析预装柱 套装(配结合/洗脱缓冲液) |
70ml rProtein G SeePUR重组蛋白G 亲和层析预装柱 (500ml Binding buffer+250 ml Elution buffer) |
1kit |
SPC150K |
Seebio rProtein G SeePUR重组 蛋白G亲和层析预装柱 套装(配结合/洗脱缓冲液) |
150ml rProtein G SeePUR重组蛋白G 亲和层析预装柱 (500ml*2 Binding buffer+500 ml Elution buffer) |
1kit |
188248 |
IgG Elution Buffer |
|
0.5L |
188247 |
Protein G IgG Binding Buffer |
|
0.5L |
附 表3 Immunoglobulin Reactivity with Protein A & Protein G
| Immuno-globulins | Protein A |
Protein G |
Immuno-globulins |
Protein A |
Protein G |
Human IgG1 |
++++ |
++++ |
Rat IgG1 |
- |
+ |
Human IgG2 |
++++ |
++++ |
Rat IgG2a |
- |
++++ |
Human IgG3 |
- |
++++ |
Rat IgG2b |
- |
++ |
Human IgG4 |
++++ |
++++ |
Rat IgG2c |
+ |
++ |
Human IgA |
++ |
- |
Rat IgM |
+/- |
- |
Human IgD |
++ |
- |
Rabbit Ig |
++++ |
+++ |
Human IgE |
++ |
- |
Chicken Ig |
- |
+ |
Human IgM |
++ |
- |
Hamster Ig |
+ |
++ |
Mouse IgG1 |
+ |
++++ |
Guinea pig Ig |
++++ |
++ |
Mouse IgG2a |
++++ |
++++ |
Bovine Ig |
++ |
++++ |
Mouse IgG2b |
+++ |
+++ |
Horse |
++ |
++++ |
Mouse IgG3 |
++ |
+++ |
Cow |
++ |
++++ |
Mouse IgM |
+/- |
- |
Pig |
+++ |
+++ |
|
|
|
Sheep |
+/- |
++ |
|
|
|
Goat |
- |
++ |
请在实验前仔细阅读Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱使用说明。同时,将需要的所有试剂、耗材拿出置于室温,恢复至室温使用。
Seebio rProtein G SeePUR重组蛋白G亲和层析预装柱可重复使用15-20次:每次使用完后用Elution Buffer 10-5柱体积洗脱1-2次;然后把柱子浸泡入20%乙醇的容器中4度存放即可;重复使用时应避免不同品系的交叉污染。为保证好的使用纯化质量,建议重复使用次数不宜过多。

