肽图分析是确认蛋白质一级结构、评价蛋白质量一致性的重要手段。蛋白经酶解后生成大量肽段混合物,依靠反相液相色谱完成分离。由于肽段数量多,部分肽段疏水性十分接近,往往需要长分析时长+浅梯度洗脱实现充分分离,这对液相系统泵的输液精度提出很高要求。
Nexera X4作为
岛津新一代超高效液相色谱系统,
在长时间浅梯度条件下
依旧可以获得优异的保留时间重现性。
浅梯度条件下的优异的重现性
以BSA胰蛋白酶酶解物作为样品开展测试,分析条件如下:
为保留高极性肽段并实现各肽段充分分离,实验设置初始有机相比例仅1%,50 min内有机相以0.78%/min的速率缓慢上升,属于长时间浅梯度,需要液相色谱输液泵具有极高的输液精度和梯度精度支持。
重现性考察UV色谱图(n=6)
酶解产生的大量肽段得到有效分离,选取不同洗脱区间5个典型肽峰,保留时间重现性(连续6次重复进样)结果如下:
所有峰均获得了优异的保留时间重现性,Nexera X4 优秀的输液性能,可以保障长时间浅梯度条件下稳定的保留时间。
搭配LCMS‑2050实现肽段双重定性
UV与MS色谱对照图
肽图图谱峰数量庞大,微小的保留时间偏移就会给肽峰识别带来困扰。将Nexera X4与LCMS‑2050单四极杆质谱联用,结合保留时间与不受保留时间波动影响的质荷比信息双重定性,提升结果的可靠性。

