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浅梯度下优异的重现性丨使用Nexera X4 超高效液相色谱仪实现可靠的肽图分析

浅梯度下优异的重现性丨使用Nexera X4 超高效液相色谱仪实现可靠的肽图分析 岛津科技资讯通
2026-09-17
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肽图分析是确认蛋白质一级结构、评价蛋白质量一致性的重要手段。蛋白经酶解后生成大量肽段混合物,依靠反相液相色谱完成分离。由于肽段数量多,部分肽段疏水性十分接近,往往需要长分析时长+浅梯度洗脱实现充分分离,这对液相系统泵的输液精度提出很高要求。


Nexera X4作为

岛津新一代超高效液相色谱系统,

在长时间浅梯度条件下

依旧可以获得优异的保留时间重现性。


浅梯度条件下的优异的重现性

以BSA胰蛋白酶酶解物作为样品开展测试,分析条件如下:

样品

BSA胰蛋白酶酶解物

仪器

Nexera X4超高效液相色谱仪

色谱柱

Shim-pack Scepter C18 120,100 mm×2.1 mm I.D.,1.9 μm

流速

0.2mL/min

梯度条件

B相1%(0 min)→40%(50 min)→90%(50-55 min)→1%(55-85 min)

检测波长

220 nm(SPD-M40 X4,STD池)

为保留高极性肽段并实现各肽段充分分离,实验设置初始有机相比例仅1%,50 min内有机相以0.78%/min的速率缓慢上升,属于长时间浅梯度,需要液相色谱输液泵具有极高的输液精度和梯度精度支持。

重现性考察UV色谱图(n=6)

酶解产生的大量肽段得到有效分离,选取不同洗脱区间5个典型肽峰,保留时间重现性(连续6次重复进样)结果如下:

峰编号

峰1

峰2

峰3

峰4

峰5

RSD(%)

0.16

0.12

0.09

0.07

0.08


所有峰均获得了优异的保留时间重现性,Nexera X4 优秀的输液性能,可以保障长时间浅梯度条件下稳定的保留时间。


搭配LCMS‑2050实现肽段双重定性

UV与MS色谱对照图

肽图图谱峰数量庞大,微小的保留时间偏移就会给肽峰识别带来困扰。将Nexera X4与LCMS‑2050单四极杆质谱联用,结合保留时间与不受保留时间波动影响的质荷比信息双重定性,提升结果的可靠性。


小结

对于肽图分析常用的长时间浅梯度条件,Nexera X4依靠独立驱动柱塞与压力反馈机制,实现精准溶剂输送,获得出色的保留时间重现性。

与LCMS-2050联用时,同时利用保留时间与质谱质量信息进行定性,降低大量肽峰识别时的不确定性,为肽图检测提供可靠解决方案。


【声明】内容源于网络
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