【前瞻设计】青年C标书：CHRM3介导的胆碱能神经—OPC样肿瘤细胞互作驱动弥漫中线胶质瘤放疗抵抗的机制研究- 大数跨境

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【前瞻设计】青年C标书：CHRM3介导的胆碱能神经—OPC样肿瘤细胞互作驱动弥漫中线胶质瘤放疗抵抗的机制研究

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2026年国家自然科学基金青年C类项目标书初稿

CHRM3介导的胆碱能神经—OPC样肿瘤细胞互作驱动弥漫中线胶质瘤放疗抵抗的机制研究

依据上一版“Cell肿瘤神经机制选题报告”中评分排第二的选题扩展撰写
适配2026年国自然青年C类项目逻辑框架（模板初稿）

说明：文中“研究基础与工作条件”中涉及申请人真实论文、样本、平台与前期数据之处，以【待补】标注，便于后续定制化替换。

项目类别	国家自然科学基金青年C类项目
建议正文定位	“神经—肿瘤互作 + 细胞状态异质性 + 放疗耐受机制”交叉方向
关键词	弥漫中线胶质瘤；胆碱能神经；CHRM3；OPC-like状态；放疗抵抗

项目名称

CHRM3介导的胆碱能神经—OPC样肿瘤细胞互作驱动弥漫中线胶质瘤放疗抵抗的机制研究

摘要（约400字）

弥漫中线胶质瘤（DMG）是以H3K27异常为核心分子特征、预后极差的儿童脑肿瘤，当前除放疗外缺乏确证有效治疗[3,14-16]。最新研究表明，脑干胆碱能投射可通过毒蕈碱受体促进DMG生长，且CHRM3在OPC-like肿瘤细胞中富集[7]。然而，CHRM3是否作为胆碱能输入的关键解码受体，并通过状态维持程序驱动放疗抵抗，尚不清楚。本项目拟聚焦“胆碱能神经—CHRM3高表达OPC-like肿瘤细胞”互作轴，结合公共单细胞/空间转录组、患者组织验证、胆碱能共培养、脑类器官与正位移植模型，系统阐明CHRM3对DMG增殖、干性维持及放疗后残存重建的作用，并解析其下游Ca2+/ERK—YAP/TEAD信号与染色质响应机制。进一步评估靶向CHRM3联合放疗的增敏效应。本研究有望从“神经递质受体解码—细胞状态维持—治疗耐受”新链条揭示DMG进展机制，为DMG联合放疗策略提供理论依据。

关键词

弥漫中线胶质瘤；胆碱能神经；CHRM3；OPC-like肿瘤细胞；放疗抵抗

一、立项依据

1. 研究背景与科学意义

弥漫中线胶质瘤是发生于脑桥、丘脑、脊髓等中线结构的高度侵袭性脑肿瘤，其分子分型已被2021版WHO中枢神经系统肿瘤分类进一步明确，临床上具有儿童高发、解剖部位深在、手术难以根治、对治疗反应短暂且极易复发等特点[3,14-16]。尽管近年分子分型、活检安全性、液体活检、细胞治疗与局部递送等方面取得明显进展，但对大多数患者而言，分次放疗仍是惟一可短期改善症状与延长生存的标准干预，疗效持续时间有限，放疗后很快进入进展阶段，提示DMG存在强烈而持久的治疗耐受机制[3,14-16,22,27-29]。

传统DMG研究更多聚焦肿瘤内在遗传与表观遗传异常，如H3K27改变、染色质稳态破坏、代谢重塑及DNA损伤修复异常等[13-21,23]。然而，DMG并非孤立生长于“被动脑组织”之中。中线脑区具有高度特化的神经调控网络、丰富的长程投射以及活跃的胶质前体细胞生态位。近年来癌症神经科学快速发展，已从“神经营养因子或神经递质促进肿瘤增殖”的描述性观察，迈向对神经—肿瘤突触、网络活动、神经免疫回路和肿瘤细胞状态耦合机制的系统阐释[1,2,4-12]。对于胶质瘤，神经元活动可通过旁分泌因子、突触样结构和功能连接性增强肿瘤扩增、侵袭与耐受，而高神经表型甚至可形成不良预后标志[4-10]。

最新Cell研究进一步证明，除谷氨酸能和GABA能信号外，脑干胆碱能投射同样能够以回路依赖方式促进DMG及其对应正常OPC的增殖，毒蕈碱型乙酰胆碱受体阻断可显著削弱这一促肿瘤效应，其中CHRM1/CHRM3在DMG中表达显著，尤其在OPC-like肿瘤细胞状态中富集[7]。这一发现提示：DMG对神经输入的“解码”并非均匀发生于所有肿瘤细胞，而可能受细胞状态特异性受体程序控制。OPC-like状态被认为是DMG中兼具增殖潜能、谱系可塑性和治疗后再扩增能力的重要恶性细胞群体[7-9,13,19]。若CHRM3恰好定义了该状态对胆碱能输入的高敏感性，则其上游连通脑区回路、下游对接增殖/存活/干性维持程序，可能成为连接“神经活动—细胞状态—放疗抵抗”的关键节点。

因此，本项目聚焦CHRM3这一具有可药化前景、但在DMG中功能分工仍未被充分阐明的胆碱能受体，拟从神经输入解码、细胞状态维持与放疗耐受重编程三个层面开展研究。该研究一方面可深化对DMG神经微环境依赖性的认识，另一方面也有望为“神经递质受体阻断联合放疗”提供机制依据与候选靶点，具有明确的科学意义与潜在转化价值。

2. 国内外研究现状与进展

2.1 癌症神经科学已成为脑肿瘤研究前沿。2023年以来，多篇Cell、Nature级文献与综述系统指出，神经系统通过直接电化学通信、神经递质释放、神经免疫调控及组织再生程序重用等方式参与多类肿瘤发生发展[1,2]。在胶质瘤领域，Taylor等发现胶质瘤突触可招募适应性可塑性机制，促进肿瘤对神经活动的利用[4]；Hausmann等证明胶质瘤网络内在节律性电活动可直接驱动肿瘤生长[5]；Tetzlaff等进一步利用逆行示踪技术刻画胶母细胞瘤的neuron-tumor network，指出神经连接本身构成治疗抵抗的重要来源，并可被靶向干预[9]。这些研究共同表明，脑肿瘤不仅“响应”神经信号，而且逐渐整合进宿主神经网络。

2.2 神经—少突胶质谱系互作提示OPC样细胞可能是神经信号优先响应者。少突胶质谱系细胞本身即具有对神经活动高度敏感的生理属性，神经元活动可以调控OPC增殖、分化及髓鞘形成[6]。Taylor与Monje综述指出，脑肿瘤常借用正常的neuron-oligodendroglial communication程序来维持恶性生长[6]。在高级别胶质瘤中，Drexler等提出“高神经表型”与功能连接度、OPC/NPC样状态富集及更差预后密切相关[8]。这意味着：OPC-like状态并非单纯的发育学标签，而可能代表一种更易接收并放大神经输入的恶性状态。

2.3 DMG中的胆碱能回路作用是最近刚被揭示的新方向。长期以来，DMG的神经活动依赖性研究主要集中于谷氨酸能旁分泌和神经元—肿瘤突触机制。Drexler等最新Cell论文显示，脑桥和丘脑相应的胆碱能中脑投射可在解剖与回路层面特异促进DMG增长；在共培养体系和药理阻断实验中，乙酰胆碱直接作用于DMG细胞，M1/M3类毒蕈碱受体拮抗可明显削弱促增殖作用[7]。该研究还显示CHRM1/CHRM3在DMG、特别是OPC-like亚群中富集，提示毒蕈碱受体并非背景表达，而可能参与细胞状态依赖的信号解码[7]。然而，该文主要证明了“胆碱能输入存在并有功能”，对M1与M3的精细分工、CHRM3对放疗后存活的作用、以及其与染色质/转录程序的耦合仍未展开。

2.4 DMG治疗耐受研究提示放疗后残存细胞具有状态选择与代谢重编程特征。近年多项研究指出，DMG可通过糖酵解增强、嘌呤补救、差异化代谢脆弱性、PI3K/mTOR依赖、DNA损伤修复与表观遗传稳态维持等机制获得治疗优势[17-23]。例如，ERK5-PFKFB3轴可驱动糖酵解并构成DMG可靶向弱点[17]；嘌呤补救代谢促进H3K27M DMG治疗抵抗[18]；PI3K/mTOR依赖在DIPG/DMG中具有明确治疗潜力[20]；PARP抑制可在HR修复缺陷背景下增强放疗及NK细胞介导效应[21]；SUV39H1相关染色质程序与ONC201联用研究进一步提示，肿瘤干性维持与治疗反应深受表观遗传状态调控[23]。但目前这些研究大多仍以肿瘤内在脆弱性为中心，对神经输入如何塑造治疗后残存状态关注不足。

2.5 研究模型和转化工具已为本项目实施提供条件。患者来源模型能够较好保留儿科高级别胶质瘤的分子异质性与药物反应差异[24]；脑类器官和神经免疫兼容模型为解析神经—肿瘤互作提供了近生理平台[25]；液体活检、血浆核小体与CSF cfDNA测序则为动态监测DMG分子状态与治疗反应提供了辅助工具[26-29]。同时，GD2-CAR T、B7-H3-CAR T、ONC201及局部递送联合放疗等临床/转化研究提示，DMG治疗已进入“机制驱动联合策略”阶段[16,22,27,28]。在这一背景下，围绕CHRM3建立“可解释、可验证、可干预”的机制链条具有较高的研究价值。

3. 现有研究的不足与本项目拟解决的关键科学问题

综合现有研究，至少存在以下三方面关键缺口：

第一，DMG中的胆碱能信号解码细胞尚未被精确定义。虽然已有工作提示CHRM1/CHRM3表达于DMG，并在OPC-like亚群中富集[7]，但尚缺乏将受体表达、空间定位、恶性细胞状态、神经邻近性与增殖/残存表型进行系统整合的研究。换言之，谁是胆碱能输入的“主响应者”仍不清楚。

第二，CHRM3下游如何将神经递质输入转化为持续的恶性状态维持信号仍未明确。作为Gq偶联受体，CHRM3理论上可牵动Ca2+、PKC/ERK、YAP/TEAD及应激转录网络，但这些通路在DMG尤其是OPC-like细胞中的层级关系、必要性与状态依赖性尚未被检验。

第三，CHRM3是否参与放疗后的生存优势与复发重建仍缺乏证据。放疗是DMG的治疗支柱，但放疗后的残存细胞如何重塑神经依赖性、是否富集CHRM3高表达OPC-like细胞，以及靶向CHRM3能否增强放疗敏感性，均属于当前领域尚未回答的问题。

围绕上述空白，本项目拟集中回答以下关键科学问题：

（1）CHRM3是否界定DMG中对胆碱能回路输入高度敏感的OPC-like恶性亚群？

（2）胆碱能神经激活后，CHRM3通过何种信号—转录—染色质响应程序维持DMG增殖、干性和治疗后存活？

（3）阻断CHRM3是否能够打断“神经输入—恶性状态维持—放疗抵抗”的连续机制链，从而提高DMG对放疗的治疗反应？

4. 本项目的核心科学假说

本项目提出如下核心假说：在DMG中，保留少突胶质祖细胞样特征的OPC-like恶性细胞高表达CHRM3，构成胆碱能神经输入的主要解码群体；脑干胆碱能投射释放乙酰胆碱后，通过CHRM3激活Ca2+/ERK及YAP/TEAD等活动依赖程序，维持OPC-like状态的增殖与干性，并在放疗应激后促进残存细胞存活和复发生长；因此，靶向CHRM3可增强放疗敏感性，是DMG联合治疗的潜在新策略。

二、研究目标、研究内容与拟解决的关键科学问题

1. 总体研究目标

本项目围绕“胆碱能神经—CHRM3高表达OPC-like肿瘤细胞—放疗抵抗”机制主线，拟实现以下总体目标：

① 明确CHRM3在DMG不同恶性细胞状态中的表达谱、空间分布及其与胆碱能神经邻近性、增殖和放疗后残存表型的关系；

② 阐明胆碱能信号经CHRM3传递后所激活的关键下游信号通路、转录因子网络与染色质响应程序，并界定其维持OPC-like状态与促进治疗耐受的分子机制；

③ 在体内外模型中验证抑制CHRM3能否增强放疗敏感性并抑制DMG复发，为后续发展联合放疗的神经递质受体靶向策略提供实验依据。

2. 研究内容

研究内容一：解析CHRM3高表达OPC-like细胞的状态特征、空间定位及其与胆碱能神经输入的耦合关系

依托公开DMG单细胞转录组、单核转录组及空间转录组数据，系统分析CHRM3在OPC-like、AC-like、OC-like等恶性细胞状态中的表达差异，构建CHRM3相关基因模块、配体—受体互作网络和增殖/干性评分。进一步在患者组织样本中联合应用多重免疫荧光、RNAscope原位杂交及IHC，验证CHRM3与OPC标志、胆碱能纤维标志及Ki67等增殖指标的共定位关系；并比较初诊与复发/放疗后样本中CHRM3阳性细胞比例变化。

研究内容二：阐明胆碱能神经经CHRM3驱动DMG增殖与状态维持的信号—转录—染色质机制

构建胆碱能神经元—DMG细胞共培养体系及乙酰胆碱/卡巴胆碱刺激体系，结合CHRM3敲低/敲除、拮抗剂阻断及救援实验，观察细胞增殖、球形成、细胞周期、克隆形成与干性标志变化。通过Ca2+成像、磷酸化蛋白检测、转录组测序、ATAC-seq/CUT&Tag等手段，解析CHRM3激活后的核心下游效应通路，重点关注Ca2+/ERK、YAP/TEAD、即刻早期基因及放疗应激响应模块，明确CHRM3在维持OPC-like恶性状态中的必要性。

研究内容三：验证CHRM3对放疗抵抗和复发形成的作用，并评估联合放疗的干预潜力

在患者来源DMG细胞和正位移植模型中，比较CHRM3高低表达状态对放疗敏感性的影响，评估其对DNA损伤修复、凋亡、细胞衰老及残存细胞再生长的调控作用。进一步采用CHRM3遗传沉默或药理抑制联合分次放疗，检测肿瘤负荷、动物生存、复发时间及组织学指标，并通过终点单细胞分析或目标基因验证，判断联合干预是否能够抑制放疗后OPC-like残存群体重建。

3. 拟解决的关键科学问题

（1）CHRM3是否是DMG中“胆碱能信号敏感型”OPC-like恶性群体的分子标识？

（2）胆碱能刺激后，CHRM3通过哪些关键信号/染色质程序将短时神经输入转化为持续的恶性状态维持？

（3）CHRM3是否直接参与放疗后残存细胞形成与复发重建，进而成为DMG放疗增敏的新靶点？

三、研究方案与可行性分析

1. 总体设计与技术路线

本项目采用“公共数据发现—患者样本验证—体外机制解析—体内功能验证”的四级递进设计。首先在公开数据中锁定CHRM3高表达恶性亚群及其空间特征；其次在临床样本中验证其病理学真实性；再次利用共培养、药理学和多组学手段解析CHRM3下游机制；最后在正位模型中检验CHRM3对放疗抵抗和复发的贡献。整体技术路线遵循“现象—机制—功能—干预”的青年基金逻辑闭环，确保每一阶段结论均可被下游实验验证。

2. 具体研究方案

模块	核心问题	关键方法	预期输出
模块1	谁是胆碱能输入的主响应细胞？	scRNA/空间组学重分析；RNAscope；多重IF；IHC	锁定CHRM3高表达OPC-like亚群及其空间邻近性
模块2	CHRM3如何维持恶性状态？	胆碱能共培养；CHRM3遗传/药理干预；Ca2+成像；RNA-seq；ATAC/CUT&Tag	明确关键信号通路与转录/染色质程序
模块3	CHRM3是否促进放疗抵抗？	克隆形成；γH2AX/凋亡检测；正位模型；联合放疗	验证CHRM3放疗增敏价值与复发抑制作用

2.1 研究内容一的实施方案

（1）公共数据重分析。收集已公开的DMG单细胞/单核转录组与空间转录组数据集，采用Seurat/Scanpy完成质控、整合、降维和细胞状态注释；依据文献定义构建OPC-like、AC-like、OC-like等状态评分，比较CHRM3/CHRM1在不同状态中的表达分布。进一步结合CellChat/NicheNet等方法评估胆碱能相关配体—受体互作与神经活动响应模块。

（2）空间定位验证。选取【待补：申请人已获批伦理并可获取的DMG石蜡或冰冻组织样本数量】例DMG样本，进行CHRM3、SOX10/OLIG2、CHAT/VAChT、Ki67等多指标检测，分析CHRM3阳性细胞与胆碱能纤维密度、血管邻近性和增殖指数的相关性。若可获得放疗后或复发样本，则比较CHRM3阳性OPC-like群体比例差异。

（3）预期结果。预计可在DMG中识别出一个CHRM3高表达、偏OPC-like、邻近胆碱能纤维且增殖活跃的恶性细胞群，放疗后该群体可能进一步富集，为后续机制研究提供对象。

2.2 研究内容二的实施方案

（1）建立胆碱能刺激模型。选用患者来源DMG细胞系或原代细胞【待补：具体模型名称】，通过乙酰胆碱/卡巴胆碱刺激、条件培养上清或与胆碱能神经元共培养模拟胆碱能输入。同步采用CHRM3 siRNA/shRNA/CRISPR干预及可获得的M3选择性拮抗剂进行阻断。

（2）检测CHRM3对增殖与干性的影响。采用EdU、CCK8、克隆形成、神经球形成、细胞周期流式及干性/谱系标志检测，比较胆碱能刺激前后及CHRM3抑制后的变化。必要时设置CHRM1并行组，用于鉴别M1与M3分工。

（3）解析下游通路。通过实时Ca2+成像评估CHRM3介导的钙信号；采用Western blot/磷酸化抗体芯片检测ERK、AKT、PKC、YAP等信号通路变化；通过转录组测序识别即时早期基因、细胞周期、应激与干性维持模块；ATAC-seq或CUT&Tag用于解析YAP/TEAD、AP-1等转录程序是否被激活，并与OPC-like状态基因模块进行关联分析。

（4）预期结果。预计CHRM3激活将促进DMG细胞进入高增殖/高干性状态，诱导Ca2+/ERK与YAP/TEAD等活动依赖程序上调；CHRM3阻断则削弱胆碱能诱导的恶性表型，并降低OPC-like状态稳定性。

2.3 研究内容三的实施方案

（1）体外放疗敏感性评价。对CHRM3高表达与敲低/抑制后的DMG细胞进行分次或单次照射，检测克隆形成存活分数、γH2AX焦点清除、Annexin V凋亡率、衰老标志及再增殖能力。结合转录组或qPCR评价放疗后残存细胞是否出现CHRM3相关程序增强。

（2）体内功能验证。建立脑桥/丘脑位点正位移植模型【待补：具体动物平台与模型条件】，分为对照组、放疗组、CHRM3抑制组和联合组，采用生物发光/影像学监测肿瘤负荷，记录生存期，并于终点进行组织学和分子检测。

（3）复发相关状态追踪。对终点组织进行IHC/IF或终点分选分析，重点观察OLIG2、SOX10、Ki67、DNA损伤修复标志及CHRM3表达变化，验证联合治疗是否抑制放疗后OPC-like残存群体重建。

（4）预期结果。预计CHRM3抑制可提高DMG对放疗的敏感性，延迟复发并延长生存；若与放疗联用显示显著协同，将为后续转化研究提供依据。

3. 关键技术、统计学与质量控制

本项目关键技术包括：DMG公开多组学重分析、原位多重检测、胆碱能共培养模型、CHRM3遗传学操作、多组学联动解析及正位移植模型。为保证结论可靠，体外实验原则上独立重复不少于3次；动物实验将依据前期效应量进行样本量估计，并采用随机分组和盲法判读。两组比较使用t检验或非参数检验，多组比较采用单因素或双因素方差分析，生存分析采用Kaplan–Meier及log-rank检验；组学分析中采用FDR校正控制多重比较误差。所有关键结果至少采用两种独立方法交叉验证。

4. 可行性分析

4.1 理论可行性：本项目紧密承接最新Cell研究所提出的DMG胆碱能依赖新现象[7]，同时融合OPC-like恶性状态、高神经表型及治疗耐受等已被反复提示的重要方向[6-8,17-23]，研究问题明确、逻辑闭环完整。

4.2 技术可行性：近年来DMG患者来源模型、脑类器官、空间转录组及液体活检技术已较为成熟[24-29]，为本项目完成从现象解析到功能验证提供了可操作平台。CHRM3作为膜受体，具备较好的药理学操作空间，也利于后续转化延展。

4.3 资源可行性：若申请人已具备【待补：儿科脑肿瘤样本来源/动物平台/单细胞分析经验/神经电生理或共培养平台】，则可直接支撑本课题实施；即使部分条件尚需合作，所涉技术均为目前国内相关平台可获得技术，不依赖极端稀缺资源。

5. 风险分析与替代方案

（1）若患者样本量不足以支撑空间验证：优先利用公开空间转录组与多重免疫组化数据库完成发现，并将自有样本聚焦于关键标志验证。

（2）若CHRM3在部分模型中表达偏低：增加不同DMG细胞系/原代模型，先按CHRM3高低分层选择适宜模型；必要时通过过表达与救援实验加强因果判断。

（3）若胆碱能共培养体系稳定性不足：可采用乙酰胆碱、卡巴胆碱、条件培养液及受体选择性激动/拮抗方案作为替代，先完成受体水平机制验证。

（4）若CHRM3对增殖影响弱而对放疗应激更显著：将研究重心转向“放疗后存活程序与状态重建”，仍可保持本项目围绕治疗耐受的科学主线。

（5）若M1与M3作用存在重叠：设置CHRM1并行比较，明确其是否为旁路补偿；必要时提出“CHRM3主导、CHRM1协同”的修正模型。

四、本项目的特色与创新之处

1. 新靶点维度：聚焦CHRM3这一在DMG中刚被最新研究提示、但尚未被深入机制化的胆碱能受体，区别于目前主要集中于谷氨酸信号、表观遗传酶及代谢通路的研究路径。

2. 新机制维度：首次将“胆碱能神经输入解码”与“OPC-like恶性状态维持”及“放疗后残存细胞重建”串联为连续机制链，强调神经信号并非一般促增殖背景，而是通过状态选择性受体程序重塑治疗反应。

3. 新视角维度：从细胞状态异质性角度理解DMG神经依赖性，提出并验证CHRM3高表达OPC-like细胞是胆碱能输入主响应群体，为解释DMG中不同恶性状态对外部信号响应差异提供新框架。

4. 新技术整合维度：联合公共多组学重分析、空间病理学验证、胆碱能共培养、染色质层面检测与放疗联合干预，形成“数据—组织—机制—体内功能”一体化研究设计，符合青年C项目“小切口、强逻辑、可落地”的特点。

5. 转化潜力维度：CHRM3为膜受体，具备药理学干预便利性；若证实其在放疗增敏中的关键作用，将为DMG联合治疗提供较清晰的后续开发路径。

五、年度研究计划及预期研究结果

年度	主要工作内容	阶段性目标
第1年	完成文献梳理与公共scRNA/空间数据重分析；初步建立CHRM3状态评分体系；完成患者样本伦理及首批组织检测。	明确CHRM3高表达OPC-like恶性群体的存在证据，形成研究内容一的基础数据。
第2年	完善组织验证；建立胆碱能刺激/共培养模型；完成CHRM3遗传与药理干预；开展Ca2+、信号通路与转录组检测。	阐明CHRM3对DMG增殖、干性和活动依赖程序的核心影响，形成研究内容二主体结果。
第3年	完成放疗联合干预体外与体内实验；整理终点分子证据；总结全课题。	验证CHRM3参与放疗抵抗并评估联合放疗价值，完成论文和基金结题所需核心数据。

预期研究结果包括：

（1）在DMG中识别并验证CHRM3高表达OPC-like恶性群体及其与胆碱能神经邻近性、增殖活性和放疗后残存的关系；

（2）明确CHRM3驱动Ca2+/ERK及YAP/TEAD等关键信号—转录—染色质程序，揭示胆碱能输入维持DMG恶性状态的新机制；

（3）获得CHRM3抑制增强放疗敏感性的体内外证据，为后续联合治疗探索提供前期基础；

（4）预期发表相关研究论文【待补：目标期刊层级】，并为后续申请面上项目或转化研究奠定基础。

六、研究基础与工作条件（模板版，待申请人替换）

1. 申请人研究基础

申请人前期在【待补：脑肿瘤/神经肿瘤微环境/儿童肿瘤/单细胞多组学/放疗生物学】方向已开展持续研究，具备【待补：代表性论文、相关基金、样本队列、实验平台】等基础。建议在正式申请书中重点补入以下内容：

（1）与本课题最接近的前期成果，如DMG/胶质瘤、神经递质受体、单细胞分析、空间转录组、放疗耐受相关工作；

（2）可直接支撑本项目实施的样本、模型或技术储备，例如患者组织资源、原代细胞系、正位移植经验、脑类器官模型、RNAscope/多重IF平台；

（3）申请人本人在多组学分析、分子机制研究和动物实验中的主导经历与能力。

2. 已具备的实验条件

本项目所需的分子生物学、细胞培养、蛋白检测、流式分析、动物成像等常规实验条件原则上为多数高校/附属医院实验平台可满足。若已建立单细胞测序分析环境、SPF动物平台及病理检测平台，则可显著提高实施效率。

3. 尚缺少的条件与解决途径

如存在【待补：胆碱能神经元共培养、脑类器官、正位脑桥注射模型等】方面经验不足，可通过与【待补：合作团队名称】合作解决。建议在正式本子中写清合作分工，但保持本项目核心科学问题由申请人独立主导。

参考文献（立项依据中已编号引用；均为2021年及以后发表）

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