本周分享 | 免疫比浊中兼顾线性和灵敏度的方法

说到线性和灵敏度，就不得不提到勾状效应。

什么是勾状效应？

抗原抗体在发生免疫反应时都是遵循一定的比例关系，比例合适的范围为等价带，此范围内抗体结合抗原比较充分，可见沉淀物形成快而多，浊度明显，抗体过剩称之为前带，抗原过剩称之为后带。

在免疫比浊应用中，抗体过剩和抗原过剩会让定标曲线呈两端的弯曲，也就是常说的S弯，导致低值端灵敏度不够，高值端过早进入平台期线性不足，更高值就是出现HOOK效应，导致测量不准。

如何解决这两个问题，有两个技术方法可以解决：

混合微球技术

目前一个比较新的，在行业内逐步流行的就是基于胶乳免疫比浊的第三代技术——混合微球技术。其技术原理也很简单：通过某一特定比例，将两种或两种以上不同粒径的乳胶微球充分混合起来，然后进行活化和包被抗体。其中大粒径的可以提高该项目的灵敏度，小颗粒乳胶微球提高该项目的检测上限。其检测的上下宽度往往是普通的3倍及以上。超优良的重复性。对高值高阳性样本有超强的抗HOOK效应的能力。因此而诞生了诸多全量程试剂，比如市面上早已流通的全量程CRP试剂。从而实现了特定蛋白分析仪比浊方法学的升级。

乳胶微球表面改性

另一个技术层面就是针对于微球原料本身这一块。

众所周知，乳胶微球的基本骨架是聚苯乙烯（PS），其单体苯乙烯是不含亲水基团，所以其所生产出来的聚苯乙烯微球也是疏水的，为了改善其在生物学中的应用，通常需要经过对微球进行表面修饰，常规的是引入磺酸基（-SO3），为了其有更好的生物偶联系，还会继续引入羧基（-COOH）和氨基（NH2）等。但是我们发现很多日本进口试剂，如积水、荣研等免疫比浊产品的试剂其R2往往是很淡的乳白色液体，但其试剂的灵敏度和线性也很高。这和乳胶微球的表面修饰有着密切的关系。

为了进一步提高胶乳微球带来的灵敏度，现技术对乳胶微球表面开始着手引入其他的化学基团。本公司胶乳微球通过适当添加含磺酸基衍生物，使得乳胶微球在水相中、同粒径下具有更高的光折射率。因其小粒径球与大粒径球具有相同光折射率，使得其灵敏度更高；又因小粒径球本身具有更好的稳定性以及比表面积，其吸附的抗体量较多，使其线性更好，制成的胶乳试剂更加稳定。其试剂更容易抗HOOK效应。

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