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本周分享 | 体外诊断胶体金技术

本周分享 | 体外诊断胶体金技术 伯仪集团
2023-05-12
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胶体金技术具有操作简单、特异性强、敏感度高、稳定性强、结果判断直观等优点, 因而特别适合于广大基层检验人员以及大批量检稿乱锋测和大面积普查等, 具有巨大的发展潜力和广阔的应用前景。


对于侧向层析的应用方向,最常用的胶体金颗粒是40nm。在标记IgG时,40 nm的胶体金颗粒提供最大的可视性和最小的空间位阻。分子量为160kDa的IgG分子,长度大约为 8nm.40-100nm间的胶体金颗粒比较顺利标记到IgG抗体上。比40nm大的颗粒有较大的可视性,但较大胶体金颗粒在520nm吸光度较小,因此较少在检测线处被捕获。综上所述,同40nm或60nm胶体金标记的抗体相比,较大颗粒的胶体金结合物对分析物具有较低的灵敏度。如果用于标记分子的分子量小于160kDa,20nm 胶体金颗粒更适合。


胶体金试剂条出现假阳性的排除解决方法:

1.NC膜的物理损伤

NC膜作为捕获抗体的固相载体,捕获抗体固定结合在NC膜上,若NC膜出现破损,包被抗体在划线过程中对NC膜造成了物理划痕,该物理划痕则有可能拦截并没有结合抗原的“胶体金-标记抗体”复合物,从而在T线显色,导致出现假阳性结果。


解决方案:在包被抗体划线操作中,将划线管路调节合适的高度及长度,避免对NC膜造成伤害。

2.标记过程中封闭不完全

胶体金上的负电荷没有被充分封闭,会与捕获抗体产生静电结合,进而产生假阳性结果。


解决方案:金颗粒剩余未被抗体结合的负电荷可以通过使用一定浓度的BSA或酪蛋白等无关蛋白质进行封闭。

3.胶体金的质量

胶体金溶液如果质量不良,例如有部分聚集体存在,聚集物粒径变大,在层析过程中容易在堵塞NC膜的孔径,因此可能在T线聚集而产生假阳性结果。


解决方案:建立可行的胶体金检测规程,通过如肉眼观测、可见光比色等规程检定胶体金的均一度以减少此类原因引起的假阳性。

4.抗体的纯度

如果所使用的的抗体纯度不高,其中未被除去的杂蛋白或者IgG降解片段则有可能和“胶体金-抗体”复合物结合,而产生假阳性结果。


解决方案:建立可行的检测规程,通过电泳等筛选优质的抗体作为原料。

5.玻纤垫的抗干扰能力

玻纤在使用前均会进行一定配方缓冲液的处理,检测样品超出了玻纤垫的缓冲能力,使得“胶体金-抗体”复合物的电荷发生了变化,未结合抗原的“胶体金-抗体”复合物与T线的捕获抗体发生了非特异结合,因此出现了假阳性结果。


解决方案:玻纤缓冲处理液中各组分和浓度优化入手,可以在其缓冲液中增加一定的BSA或酪蛋白提高试剂条的抗干扰能力,以避免假阳性的发生。


随着IVD检测技术的发展,尤其近几年化学发光、免疫荧光的迅猛发展,但胶体金试纸条因其简单、快捷、方便等优势,几乎很难被其它技术代替仍会具有一定的市场定位。



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