“含西地那非（Viagra）衍生物的掺假天然产品提取物的检测”
Kimberly L. Colson*、Sarah Luchsinger和 Joshua M. Hicks；Bruker BioSpin，美国马萨诸塞州比利里卡
在天然产物中掺杂西地那非（伟哥）、磺胺乙酰萘嘧啶、他达拉非、伐地那非或其它衍生物，是一个目前普遍存在的问题。
同样常见的是掺假者屡次尝试逃避检测，例如定期改变天然产物样本中的衍生物，寄希望于面对靶向分析方法时，这样的掺假物不会被检测出来。
Regenerect是一种针对勃起功能障碍患者的产品，2011年4月，有两个批次（100521和112850）由于在FDA实验室的分析试验中被检出含磺胺乙酰萘嘧啶而自愿召回。
图1：Regenerect的供应商补充事实陈述。
在这项应用研究中，我们使用1H NMR波谱评估了来自被召回批次和未召回批次的Regenerect样本。
进行了批次比对、磺胺乙酰萘嘧啶的检测与定量以及成分重建，并通过子谱分析对西地那非衍生物的自动检测方法进行了评价。
方法
筛选方法需要高度可重复的数据。如在多位点验证试验中所展示的那样，NMR具有优异的再现性。
NMR数据是使用一台配备5mm TCI CryoProbe探针的Bruker AVANCE III获得的。采用64排/64K点/4s弛豫延迟/2.8K温度设定/NOESY 1D脉冲序列。
通过在DMSO-d6中溶解25mg进行制备样本。Bruker Assure™ Raw Material Screening（RMS）用于对溶液中的化合物进行自动量化。这涉及NMR SBASE（基础波谱）的产生以及量化校准波谱仪的使用。
非靶向分析
作为对复杂混合物的一种简单质量控制手段，使用Assure-RMS，针对来自参考样本的NMR波谱进行位点和强度匹配。使用了完整的1H NMR波谱（17～2ppm）。
90%（绿/黄）和80%（黄/红）的匹配因子和阈值设置，提供了评估各批次是否具备一致性的快速手段。5个NMR波谱的分析总耗时仅为几秒钟。
图2：Assure-RMS显示，来自3家不同供应商（Online Health、Kent North和Ebay）的Regenerect样本的匹配性比较。100521批次明显不同于1105006批次。100521批次（掺假批次）的批次间一致性较高。
详细检查
对来自所含提取物（包括桑蚕、白柳树皮和牡蛎）、以及失败批次样本的NMR波谱的目视检查，显示了一些预期材料的存在。
纯粹的“枸杞”样本是无法获得的。枸杞，也被称为Goji，被纳入比较。掺假批次的人工重建，在自动分析中作为一种学习工具。
图3：Regenerect_1除了含有大量未在补充事实中申报的物质（以 * 表示）外，还含有家蚕、白柳树皮和牡蛎提取物。
靶向分析：掺假
Viagra衍生物常被用作掺假物
图4：磺胺乙酰萘嘧啶的标准样本不可用。（a）通过从掺假样本中减去识别出的已知成分，生成该材料的SBASE条目（图3）。该SBASE条目被用来搜索其它Regenerect样本（B及以下）。
掺假物定量分析
利用Assure-RMS（图5）确定磺胺乙酰萘嘧啶的存在与否及其数量。
该方法使用芳香信号（8.00、7.92和7.44ppm），以及目标材料的SBASE（图4）。
图5：Regenerect_1的Assure-RMS报告表明磺胺乙酰萘嘧啶的存在和数量，以及样本不符合标准的Regenerect规格。
NMR是一种重要的工具，提供了快速评估产品质量和批次一致性的手段。
NMR波谱的高再现性使高复杂度混合物的重建成为可能。
因此，通过NMR获得的分子特异性信息对于确定特定的掺假物是必要的，并且可用于无可用掺假标准时的定量。
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