质控系列小知识(Ⅰ)-生物制药细胞库的质量控制

生物药作为当前药企研发的一大领域，包括mRNA产品、基因治疗药物、CAR-T药物等，均涉及到细胞建库的问题。细胞库的质量控制可以确保生产的可持续性和产品的一致性。

细胞库建立和检定过程中，需要对细胞进行严格的筛选和鉴定，以保证细胞的质量和稳定性。只有符合标准要求的细胞才能被用于药物的制备和生产，从而保证药物的疗效和安全性。另外，细胞库的检定也是监管机构审查的必查项目。例如，在国内，细胞库的质量管理需要遵守《中国药典》的规定，并接受国家药品监督管理部门（CDE）的审查。如果细胞库的质量不符合规定，将会影响药物的审批和上市。

细胞库的建立可为生物制品的生产提供检定合格、质量相同、能持续稳定传代的细胞。细胞建库应在符合中国现行《药品生产质量管理规范》的条件下制备。三级细胞库管理包括细胞种子（Cell Seed）、主细胞库（MCB）及工作细胞库（WCB）的管理。在某些特殊情况下，也可采用细胞种子及MCB二级管理，但须得到国家药品监督管理部门的批准。

由一个原始细胞群体发展成传代稳定的细胞群体，或经过克隆培养而形成的均一细胞群体，通过检定证明适用于生物制品生产或检定。在特定条件下，将一定数量、成分均一的细胞悬液，定量均匀分装于一定数量的安瓿瓶或适宜的细胞冻存管，于液氮或-130℃以下冻存，即为细胞种子，供建立主细胞库用。

对于引进细胞，生产者获得细胞后，冻存少量细胞，经过验证可用于生物制品生产，此细胞可作为细胞种子供建立主细胞库用。

取细胞种子通过规定的方式进行传代、增殖后，在特定倍增水平或传代水平同次均匀地混合成一批，定量分装于一定数量的安瓿瓶或适宜的细胞冻存管，保存于液氮或-130℃以下，经全面检定合格后，即可作为主细胞库，用于工作细胞库的制备。生产企业的主细胞库最多不得超过两个细胞代次。

工作细胞库的细胞由MCB细胞传代扩增制成。由MCB的细胞经传代增殖，达到一定代次水平的细胞，合并后制成一批均质细胞悬液，定量分装于一定数量的安瓿瓶或适宜的细胞冻存管中，保存于液氮或-130℃以下备用，即为工作细胞库。生产企业的工作细胞库必须限定为一个细胞代次。冻存时细胞的传代水平须确保细胞复苏后传代增殖的细胞数量能满足生产一批或一个亚批制品复苏后细胞的传代水平应不超过批准用于生产的最高限定代次。所制备的 WCB 必须经检定合格（检定项目见下文表1）中有关规定后，方可用于生产。

细胞检定主要包括以下几个方面:细胞鉴别、外源因子和内源因子的检查、成瘤性/致瘤性检查等。必要时还须进行细胞生长特性、细胞染色体检查，细胞均一性及稳定性检查。这些检测内容对于MCB细胞和WCB细胞及生产限定代次细胞均适用。

细胞检定项目的基本要求见表1。细胞库建立后应至少对 MCB细胞及生产终末细胞（EOPC）进行一次全面检定。当生产工艺发生改变时，应重新对 EOPC 进行检测每次从MCB建立一个新的WCB，均应按规定项目进行检定。

表 1 细胞检定项目的基本要求

注：EOPC表示生产终末细胞，是指在或超过生产末期时收获的细胞，尽可能取按生产规模制备的生产末期细胞。“+”为必检项目，“-”为非强制定项目，“（+）”表示需要根据细胞特性、传代历史、培养过等情况要求的检定项目。

目前越来越多的企业进入细胞治疗领域，细胞治疗产品通常具有有效期短、样品量少的特点，无法满足传统的检测方法在检测周期和样品量上的要求，例如支原体检测和无菌检测。因此，企业急需开发、采用新型检查方法，以适应细胞治疗产品的特点。

核酸扩增技术基于聚合酶链式反应，对待检核酸序列进行特异性扩增，然后转化成荧光等可视化信号，即可完成定性、定量检测。核酸扩增技术具有灵敏、特异、操作简便等特点，通常数小时内即可完成样品处理及检测操作。因此，核酸扩增技术可应用于细胞治疗产品的质量控制。

2020版《中国药典》虽然并未收录核酸扩增技术作为支原体检测方法，但其中也提到“也可采用经国家药品检定机构认可的其他方法”。NAT方法从当前支原体快速检测方法中脱颖而出，已经被美国药典、欧洲药典和日本药典收录，并明确提到NAT方法在经过适当验证后，可用于检测方法补充或替代药典方法进行放行检测。

2020年版《中国药典》第四部通则9201，药品微生物检验替代方法验证指导原则提出，随着微生物学的迅速发展，制药领域不断引入了一些新的微生物检验技术，大体可分为三类：

① 基于微生物生长信息的检验技术，如生物发光技术、电化学技术、比浊法等；

② 直接测定被测介质中活微生物的检验技术，如固相细胞计数法、流式细胞计数法等；

③ 基于微生物细胞所含有特定组成成分的分析技术，如脂肪酸测定技术、核酸扩增技术、基因指纹分析技术等。

《CAR-T细胞治疗产品质量控制检测研究及非临床研究考虑要点》中提到，在可行的情况下，首选药典方法用于无菌检测，但考虑到CAR-T细胞产品的特殊性，也鼓励研究者开发快速的无菌检测法，但应与药典方法平行进行，在获得充分的比对数据后，结合无菌生产全过程的风险评估设计放行策略，才有可能替代药典方法。

USP<1071>Rapid microbial tests for release of sterile short-life products a risk-based approach介绍了有效期较短的无菌产品放行的快速微生物测试方法，包括ATP生物发光法、核酸扩增法、流式等，并详细阐述了这些替代方法的特点。

EP 2.6.21 Nucleic acid amplification techniques介绍了核酸扩增法可作为替代方法，并详细阐述了该方法作为替代法需验证的性能。