类器官
研究中的组织病理学检测应用
一种富含神经胶质的新型皮质类器官模型研究（二）
类器官是一种体外培养的3D细胞模型，可模拟原位组织的结构与功能。组织病理学检测在类器官研究中应用广泛，可用于评估其结构和功能，并助力药物筛选与个性化治疗。
美国索尔克生物研究所遗传学实验室的研究团队在Nature Biotechnology期刊（IF = 59.1）发表研究论文，介绍了一个新的胶质细胞丰富的皮质类器官模型并且能够加速星形胶质细胞的生成，详细内容可移步至本公众号往期内容查看或点击下方原文链接。本期着重分享、介绍该文章中的组织学处理及免疫荧光实验方法。
组织学处理
体外培养的类器官在4%多聚甲醛（PFA）中固定45-60分钟，随后用PBS洗涤三次。然后将类器官转移至4°C的30%蔗糖溶液中过夜。将4-6个类器官转移至组织冷冻培养基的包埋块中，在干冰上冷冻，并储存于-80°C。
为获取含有类器官移植物的脑组织，先使用氯胺酮/甲苯噻嗪（130 mg/kg : 15 mg/kg；腹腔注射）对小鼠进行深度麻醉，然后经心脏灌注15 ml冰生理盐水，接着灌注15 ml 4% PFA。随后取出大脑，转移至含有4% PFA的15 ml锥形管中，在4°C下进行过夜后固定。将大脑在含有0.05% NaN₃的30%蔗糖溶液中4°C冷冻保护48-72小时。将每个大脑冠状面修整后，包埋在组织冷冻培养基中。
在切片前，所有包埋块需在冷冻切片机的温度下平衡约30分钟。使用冷冻切片机（徕卡）对类器官和脑组织进行切片，将其贴在载玻片上，室温干燥30分钟，储存于-20°C。对于每组切片，每隔一定间隔选取一张切片收集到载玻片上，共收集20张载玻片，重复此收集方法直至组织用尽。
富含神经胶质的皮质类器官被移植到小鼠颅内
免疫组织化学
对解冻后的载玻片进行免疫荧光染色，用疏水性的PAP 笔勾勒出组织区域和载玻片边缘。将载玻片用PBS洗涤三次，在湿润的培养箱中，于封闭液（5%正常驴血清、0.1% Triton X-100的PBS溶液）中室温封闭1小时。类器官载玻片在4°C下与稀释于封闭液中的一抗孵育过夜。一抗包括多种针对不同蛋白的抗体，如兔抗NFIA、大鼠抗SOX2、兔抗GFAP等。用PBS洗涤三次后，再将载玻片与适当的荧光标记二抗在室温下、黑暗环境中孵育1小时，使二抗与一抗结合，从而标记出目标蛋白的位置。最后，用DAPI对细胞核进行复染5分钟，再用PBS冲洗三次，然后用封片剂封片，在室温下干燥至少48小时后进行成像采集。载玻片储存于4°C。
徕卡生物
助力类器官研究中的组织病理学检测
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参考文献
Wang M, Zhang L, Novak SW, et al. Morphological diversification and functional maturation of human astrocytes in glia-enriched cortical organoid transplanted in mouse brain. Nat Biotechnol. 2025 Jan;43(1):52-62. doi: 10.1038/s41587-024-02157-8.
点击链接查看原文：https://www.nature.com/articles/s41587-024-02157-8
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