质控系列小知识(Ⅱ)-溶瘤病毒产品的质量研究

溶瘤病毒（Oncolytic Virus，OVs）疗法是一种新型的肿瘤免疫治疗方法，溶瘤病毒是一类天然或经过基因重组的病毒，它能够特异性地在肿瘤细胞内复制并造成肿瘤细胞裂解，癌细胞裂解后释放的肿瘤抗原能够引起免疫应答反应，引导免疫系统对其他癌细胞甚至远端病灶展开攻击（图1）。

溶瘤病毒疗法兼具杀伤效率高、靶向性强、副作用小、成本低廉、避免耐药性等优势，可与化疗、放疗、免疫治疗等联合应用，具有协同增效的作用，有望成为继肿瘤免疫检查点抑制剂后癌症治疗的下一个重大突破。

质量研究需选择代表性工艺批次（如非临床研究批次、临床研究批次和/或商业化工艺批次等）以及适当生产阶段的样品（如起始原材料、工艺中间体、原液、制剂等）作为研究对象，采用物理化学、生物学和免疫学等一系列分析方法进行研究。研究项目需全面充分，尽可能涵盖所有可能与产品安全性、有效性相关的质量项目，一般包括鉴别和结构分析，生物学活性，含量，纯度、杂质和污染物，以及其他特性等。

生物学活性可采用体外法检测溶瘤病毒产品对代表性易感肿瘤细胞的毒性/裂解作用和/或其在细胞中的复制能力等，或采用动物/人体肿瘤细胞原代培养物进行检测。在某些情况下，当体外实验并不能完全反映溶瘤病毒产品的体内效应时，可考虑采用动物体内检测方法进行检测。在有些溶瘤病毒产品中，生物学活性检测还需要结合转基因表达水平和生物学特性进行定量和定性分析。

溶瘤病毒产品可通过物理滴度（如病毒总颗粒数、基因组拷贝数、结构蛋白含量等）、感染性滴度等检测确定病毒含量。物理滴度可通过物理、生物物理等方法来测定颗粒的物理数量，或测量病毒颗粒内已知分子量和拷贝数的某种代表性的结构蛋白来评估病毒颗粒数。感染性滴度可采用噬斑形成单位（PFU）、半数组织/细胞培养感染剂量（TCID50/CCID50）等基于细胞的体外检测方法。

产品纯度和杂质的研究需结合病毒结构特点、生产工艺特点等选择适宜的分析方法和检测项目，并拟定合理的标准限度。产品相关杂质一般包括分子变体、非完整包装病毒（如非包膜病毒颗粒、空壳病毒颗粒等）、错误包装病毒颗粒、无活性病毒颗粒、病毒颗粒聚集体等；工艺相关杂质主要包括起始原材料来源（如细胞碎片、宿主细胞DNA、宿主细胞蛋白等）、生产用原材料来源（如培养试剂、纯化试剂等）和设备/耗材来源的杂质；污染物指生产过程中引入的微生物（如细菌、真菌、支原体、外源病毒因子等）或其它相关组分（如细菌内毒素等）。

结合产品类型及不同剂型开展研究，可能包括外观、颜色、澄清度、可见异物、不溶性微粒、pH值、渗透压摩尔浓度、装量/装量差异、水分（如适用）、辅料含量等。