女性癌症类器官研究系列
宫颈癌类器官培养
1.背景介绍
宫颈癌是全球第四常见癌症，也是女性癌症死亡的第四大原因[1]。我国已经实施“两癌”筛查计划和“到2030年加速消除宫颈癌”卫生计划，但宫颈癌的发病率和死亡率仍然呈上升趋势[2-4]。
研究人员目前已成功构建多种类型的宫颈癌类器官。这些类器官在遗传和分子水平上高度模拟原始肿瘤组织，其突变谱与肿瘤组织高度一致，并且核心突变在长期传代过程中保持稳定。类器官保留并维持致病性HPV基因组，包括高危HPV亚型（HPV16、HPV18、HPV45）及其病毒整合和癌基因表达。这一模型为宫颈癌的体外机制研究、治疗性疫苗筛选及新型治疗策略开发提供了重要实验平台。
宫颈癌类器官的应用[5]
2.实验所需材料
2.1主要实验工具、耗材
1
剪刀镊子
2
1.5、15和50mL离心管
3
37℃水浴锅
4
70μm细胞筛
5
低温离心机
6
全自动组织解离仪（TDI-008，一米生物）
7
全自动活细胞成像仪（YM-RQ-001，一米生物）
8
倒置显微镜
9
6孔和24孔培养板
10
培养箱
2.2主要试剂
上述试剂均购自一米生物公司
3. 实验流程
3.1 实验前准备
1
高压灭菌并烘干剪刀镊子
2
解冻分装好的基质胶和培养基
3
抗粘附液润洗过滤筛、离心管和枪头等
3.2 组织样本采集与运输
1
组织采集注意事项
将无菌手术室采集的宫颈癌组织放入装有组织保存液的保存管中；随后将保存管置于冰盒中，保持周围温度4℃，运输至实验室；
2
组织预处理：去除坏死组织、血块等；
3
记录信息：拍摄组织样本照片，记录相关信息，包括但不限于样本编号、采集日期、组织类型。
3.3 组织消化与细胞分离
1
消化前处理：使用组织清洗液清洗组织3次，转移至1.5mL离心管中，将组织剪碎至大约0.5-1mm3的组织块，剪碎后的组织转移至6孔板中；
2
消化：加入2-5mL组织消化液，使用全自动组织解离仪，选择宫颈癌程序进行解离，可根据解离程度适时暂停程序镜检观察；
注意：或者选用手工法消化，即加入2-5mL组织消化液，消化20-30min，消化过程中每隔10min观察消化情况，当观察到出现小细胞团时，即可终止消化；
3
终止消化：消化完成后，加入2倍体积组织清洗液终止消化（2倍体积指相对于组织消化液）；
4
过滤：使用70μm筛网（放置于50mL离心管上）进行过滤，收集过滤液并300g离心3min，丢弃上清液；
注意：如果存在红细胞（沉淀呈红色或暗红色），加入3-5mL红细胞裂解液，室温孵育3-5min使红细胞溶解。随后加入等体积的组织清洗液终止裂解，4℃、300g离心3min（沉淀呈现淡黄色或乳白色）。
3.4 类器官接种与培养
1
培养：添加25倍体积的基质胶进行重悬（25倍体积指相对于沉淀），将混合物接种于预热的24孔板中；将其置入37℃培养箱中，静置30min后添加预热的宫颈腺癌类器官培养基培养；
2
拍照：使用倒置显微镜每隔一天拍照记录状态。此外，也可以使用全自动活细胞成像仪实时拍照，便于长期培养记录。
颈癌类器官原代明场图片
参考文献
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