鼻腔黏液纤毛传输系统由呼吸道表面的黏液痰及其下方的纤毛上皮层组成。通过建立人类原代上皮细胞的体外模型，以及探究介导上皮细胞功能变化的潜在机制，对于研究呼吸道上皮在微生物感染或吸入剂作用下的关键功能至关重要。本文将简要介绍鼻黏膜类器官培养的大致流程。
主要试剂和耗材
鼻黏膜类器官培养过程中主要使用表1.所示试剂。
表1
混合胶的配制
1. 先将100 μL的DMEM与1 mL的Advanced DMEM/F12混合，再加入875 μL的I型胶原，最后加入15 μL的1 mol/L无菌NaOH溶液。
2. 将250 μL混合胶原溶液倒入transwell小室里的12 mm直径的内皿中，在37 ℃培养箱中固化30 min，备用。
类器官培养基的配制
按照表2.中的要求配制类器官培养基。
表2
人鼻腔纤毛上皮细胞分离及培养
1. 用含2%双抗的HBSS溶液震荡洗涤鼻息肉或中鼻甲手术剩余组织3-5次;
2. 后将其置于冰上剪切至0.5 mm3以下;
3. 加入适量消化酶1，37 ℃恒温消化2 h;
4. 后再加入适量消化酶2消化10 min;
5. 1500 r/min离心3 min，弃上清;
6. 加入HBSS溶液重悬;
7. 用100 μm滤网过滤得鼻黏膜上皮细胞;
8. 用红细胞裂解液去除其中的红细胞;
9. 离心后将细胞沉淀加入预先配制的混合胶中铺于上述备用的Transwell内皿中，外皿中加入类器官培养基，置于37 ℃细胞孵箱中;
10.加入鼻黏膜类器官培养基培养21 d，培养基隔天更换1次，视类器官生长情况进行传代。
图1.鼻黏膜类器官
以上内容为鼻黏膜类器官培养大概流程，现如今鼻粘膜及其他鼻类器官的发展与培养相关研究日益深入，鼻粘膜类器官培养方法也逐步简化明确，但是在鼻类器官研究的道路上，仍旧存在很多问题，需要我们继续探索。
参考文献
[1] Dobzanski A, Khalil SM, Lane AP. Nasal polyp fibroblasts modulate epithelial characteristics via Wnt signaling. Int Forum Allergy Rhinol. 2018 Dec;8(12):1412-1420. doi: 10.1002/alr.22199.
[2] 汪珂,于言,韩日,等.分化可控的人类鼻黏膜类器官模型的建立[J].南方医科大学学报,2022,42(06):868-877.
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