酸性橙Ⅱ属于化工染料，食品工业中，酸性橙Ⅱ属非食用色素，食品中禁止加入。如果在食品加工中使用，人食用后可能会引起食物中毒，长期食用甚至会致癌。但是，一些不法商贩利用其色泽鲜艳、着色力强、价格低廉的特点，将其作为色素掺入辣椒面的生产与加工中以牟利，从而严重危害着消费者的身体健康。
华谱生物参照SN/T 3536-2013出口食品中酸性橙Ⅱ号的检测方法，使用HPSW WAX弱阴离子交换固体萃取柱进化，对标准进行了优化，获得了满意的实验结果。
【标准溶液的配制】
准确称取酸性橙II号10.0mg（纯度≥95%），用水溶解后定容至100mL，配成100μg/mL的标准贮备液。
【试液配制】
2%甲酸水溶液：量2mL甲酸，用水定容至100mL。
10%氨水甲醇溶液：量取10mL氨水，用甲醇至100mL。
乙醇-氨溶液：取20mL氨水，加入70mL乙醇，用水定容至100mL，摇匀后备用。
0.02mol/L乙酸铵溶液：准确称取1.54g乙酸铵，加水至1000mL，混匀。
【样品提取】
准确称取辣椒酱2.0g(精确至0.01g)于50mL离心管中，加入20mL乙醇-氨水溶液，超声提取30min，再振荡提取10min，低温离心4℃8000r/min离心10min，重复提取一次，合并上清液，60℃氮吹浓缩至5-8mL左右。用甲酸调节pH至6左右，混匀后待净化。
【净化】 HPSW WAX固相萃取柱（60mg/3ml）
（1）活化：依次用6mL甲醇、6mL2%甲酸水溶液
（2）上样淋洗：将待净化液全部过柱，弃去流出液，依次用3ml2%甲酸水溶液、3mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，真空抽至柱体近干。
（3）洗脱：用6 mL10%氨水甲醇溶液洗脱，收集全部洗脱液，于60℃氮气吹至近干，准确加入2mL50%甲醇水溶液溶解，涡旋混匀，过0.45μm滤膜，上机。
【参考仪器条件】
仪器：液相色谱Shimadzu LC-16
色谱柱：HPSW C18(250mm×4.6mm,5μm)
检测器：紫外
检测波长：484nm
流速：1.0ml/min
进样体积：10μL
柱温：30℃
流动相：A为0.02mol/L乙酸铵溶液，B为甲醇
洗脱条件：A：B=35：65 等度洗脱
【实验结果】
基质加标回收率数据
图1-标准溶液图
图2-辣椒酱样品加标图
图3-辣椒酱样品图
图4-卤肉样品加标图
图5-卤肉样品图
【注】
①上样液调节pH至6左右，弱酸性能够有效保证上样时目标化合物能够有效地吸附。
②离心时4℃或者以下，可以更好地抑制样品中的脂肪在水溶液表面的分散，有助于油脂的凝固，样品更易转移。
③当用水复溶结果不理想时，可以用50%甲醇水复溶，过滤滤头PVDF需弃去粗滤液，保证滤头吸附充分；或者水复溶，用亲水滤头PTFE过滤。
④标准中使用氨基阴离子交换固相萃取柱，经测试HPSW WAX弱阴离子交换固体萃取柱效果更好，规格60mg/3mL与150mg/3mL回收率均能达到90%-100%。
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华谱生物主要产品包括：固相萃取柱、筛板、色谱柱、小柱柱管、QuEChERS（净化管、盐包、陶瓷均质子）、真菌毒素免疫亲和柱、样品瓶盖垫、针式滤器、配套各厂家原子吸收的石墨管和微波消解的消解罐。
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