三氮脒是传统使用的广谱抗血液原虫药，均用于治疗动物的原虫感染（如锥虫病、梨形虫病等），目前临床数据显示，一般在给药后3~7天内乳中可能仍存在少量残留。
为减少药物借由食物链进入人体的机会，我国已发布标准GB 31650-2019中规定牛乳中三氮脒的最大残留限量为0.15mg/kg。
华谱生物参考GB 31658.18-2022食品安全国家标准动物性食品中三氮脒残留量的测定，通过弱阳离子交换固体萃取柱WCX净化，该方法具备回收率高、方法稳定等优势。
参照方法：GB31658.18-2022 食品安全国家标准动物性食品中三氮脒残留量的测定
产品名称：HPSW WCX
规格：60mg/3ml
【标液配置】
（1）三氮脒标准储备液：标准品二乙酰胺三氮脒(CAS：908-54-3)，取二乙酰胺三氮脒标准品适量(相当于三氮脒约10mg)，精密称定，加水适量使溶解并稀释定容至10ml。
（2）三氮脒标准工作液：吸取适量标准储备液，配制成10μg/mL的三氮脒标准工作液。
（3）三氮脒上机标准品：吸取适量三氮脒标准工作液，用定容液配置成5μg/mL。
（4）定容液即洗脱液：乙酸甲醇溶液(pH7.0)取冰乙酸6ml，加甲醇94ml，混匀，用氨水调节pH至7.0±0.05。
【样品提取】
称取5g纯牛奶样品到50ml具塞离心管中，准确加入0.5%乙酸乙腈溶液5ml，涡旋混匀后，再加入5ml水，涡旋1min，振荡10min，10000转/分离心5分钟，移取全部上清液为待净化液。
0.5%乙酸乙腈溶液：取冰乙酸2.5ml，用乙腈稀释至500ml，混匀。
【净化】 HPSW WCX（60mg/3ml）
【活化】 3mL甲醇，3ml水
【上样】 取全部待净化液过柱，弃去流出液。
【淋洗】 依次用5%氨水溶液3ml、甲醇3ml淋洗，弃去流出液，吹干小柱。
【洗脱】 用1ml乙酸甲醇溶液(pH7.0)洗脱，抽干，收集洗脱液，涡旋混匀，过滤，上机分析。
【参考仪器条件】
仪器：液相色谱Shimadzu LC-16
色谱柱：HPSW PR-C18(4.6mm×250mm,5μm)
检测器：紫外
检测波长：370nm
流速：1.0ml/min 进样体积：20μL 柱温：35℃
洗脱条件：
流动相A:0.02mol/L甲酸铵溶液(pH4.0)，取甲酸铵1.26g，加水900ml溶解，用甲酸调节pH至4.0±0.05，加水稀释至1000ml。
实 验 结 果
加标水平浓度：2mg/kg（5μg/mL）
图1-三氮脒标准品
图2-牛奶样品加标
图3-牛奶样品
某品牌纯牛奶，检出三氮脒为0.02mg/kg，符合我国标准GB 31650-2019中规定牛乳中三氮脒的最大残留限量为0.15mg/kg的限度要求。
【注意事项】
①洗脱液乙酸甲醇溶液需要调节pH至7.0，测试未调pH的洗脱液洗脱，回收率偏低。
②提取溶液0.5%乙酸乙腈溶液，如果按标准加10ml，测试原液里三氮脒含量低，经测试，提取液加5ml，混匀后，加水5ml，原液回收没问题。
③当加基质回收率偏低，应排除提取是否充分。
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