有机酸是分子结构中含有羧基的一类化合物,食品中常见的有机酸有柠檬酸、苹果酸、酒石酸、乳酸等,其作用机理是调节食品的pH,防止食品变质,同时改善食品口感。
《GB 5009.157-2016 食品安全国家标准 食品有机酸的测定》本方法适用于果汁及果汁饮料、碳酸饮料、固体饮料、胶基糖果、烘焙食品、小麦粉制品、果冻等中的7种有机酸测定。此标准用2个运行方法检测7种有机酸,华谱生物优化运行方法,通过使用HPSW SAX小柱,调整流速及梯度比例,检测食品中有机酸,节约了运行时间。
【标准溶液的配制】
因基质多数都是阳性样品,需根据空白样品的含量,调节加标浓度。
【试液配制】
磷酸溶液(0.1%):量取磷酸0.1mL,加水至100mL,混匀。
50%乙腈水溶液:量取50mL乙腈,用水稀释至100mL,混匀。
氢氧化钠溶液(1mol/L):称取4g氢氧化钠,用水溶解并稀释至100mL。
1%磷酸-50%乙腈水溶液:吸取1mL磷酸,用50%乙腈水溶液稀释至100mL,混匀。
【样品提取】
称取5 g(精确至0.01 g)均匀试样,放入100mL容量瓶中,加入40 mL水溶解后,用无水乙醇定容至刻线,摇匀。静置10min。
准确移取上清液20 mL于100 mL鸡心瓶中,向鸡心瓶中加入10 mL无水乙醇,在80°C±2 °C下旋转浓缩至近干时,再加入5 mL无水乙醇继续浓缩至彻底干燥后,用1 mL×1 mL水洗涤鸡心瓶2次,作为待净化液。
【净化】 HPSW SAX固相萃取柱(1000mg/6ml)
(1)活化:依次用5mL甲醇、5mL水
(2)上样淋洗:将5mL待净化液过柱,弃去流出液,依次用5ml乙腈淋洗,弃去淋洗液,真空抽至柱体近干。
(3)洗脱:用10 mL1%磷酸-50%乙腈水溶液洗脱,收集全部洗脱液,于45℃氮气吹至近干,准确加入1mL0.1%磷酸溶液溶解,涡旋混匀,过0.45μm滤膜,上机。
【参考仪器条件】
仪器:液相色谱Shimadzu LC-16
色谱柱:HPSW AQ-C18(250mm×4.6mm,5μm)
检测器:紫外
检测波长:210nm
流速:1.0ml/min
进样体积:20μL
柱温:40℃
流动相:A为0.1%磷酸溶液,B为甲醇
洗脱条件:
【实验结果】
基质加标扣除基质回收率数据
图1-标准溶液图
图2-样品加标图
图3-样品图
依次出峰为:酒石酸、苹果酸、乳酸、柠檬酸、丁二酸、富马酸、己二酸
【注】
①标准方法是两个不同的运行方法检测7种有机酸,为了方便检测,我们采用的梯度流速结合比例的变化,使得一个方法可以检出7种有机酸,低流速是为了更好的分离开苹果酸位置的干扰峰。根据实验仪器与色谱柱调节1-10min的流速,使得苹果酸干扰峰分开。
②上样溶液如果过于酸性会使得小柱无法更好的吸附,建议碱性溶液上样,pH8-9。
关于华谱生物
华谱生物科技(重庆)有限公司是一家致力于实验室耗材研发、生产、销售、服务为一体的高新技术企业,也是同时实现色谱填料和筛板样品前处理耗材的生产商。产品广泛应用于各大科研院所、各省市计量院、疾控中心、环境监测站、食品检测公司等。
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