食品合成着色剂,也称为食品合成染料,是用人工合成方法所制得的有机着色剂,相较于食用天然色素,因着色能力强、色泽鲜艳、不易褪色、稳定性好、易溶解、易调色、成本低等优势,成为臻选。
新国标使用WAX混合型弱阴离子交换或等效固相萃取柱,华谱生物科技(重庆)有限公司HPSW WAX小柱回收率良好,此次测试HPSW-PA测试合成色素,11种合成色素为新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红、靛蓝、亮蓝、柠檬黄、喹啉黄。回收率均在90%-100%,性能良好,可以作为HPSW-WAX的等效柱。
也适用于标准SN/T 1743-2006 食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测高效液相色谱法;此次检测也优化了方法,节约时间。
【标液配置】
合成着色剂标准使用液1μg/mL(新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红7种标准混合液)及5μg/mL(靛蓝、亮蓝、柠檬黄、喹啉黄4种标准混合液),临用前用水配置,过0.45μm亲水滤膜(例:聚偏氟乙烯PVDF或亲水聚四氟乙烯PTFE)。
【试液配制】
乙醇氨水溶液:量取无水乙醇700ml,加入4ml氨水,用水稀释至1L,混匀。
5%氨水甲醇溶液:移取浓氨水5ml,用甲醇稀释并定容至100ml,混匀。
乙酸铵溶液(20mmol/L):称取1.54g乙酸铵,加水溶解并稀释至1000ml。
乙酸铵缓冲液(pH=9.0):乙酸铵溶液加氨水调pH至9.0。
2%甲酸水溶液:移取甲酸2ml,用水稀释至100ml。
【样品提取】
1.液体类试样(饮料、配制酒、调味乳等)、冷冻饮品(风味冰、冰棍等):
1)准确称取液体试样2g(精确至0.001g),冷冻饮品可先温水浴加热融化再称样,置于50mL离心管中,再加入25mL乙醇氨水溶液,涡旋1min,5000r/min离心5min,取上清液,若残渣仍有颜色残留,可再次提取一次,合并上清液,并用乙醇氨水溶液定容至50mL,即得提取液。
2)准确吸取上清液5mL,加入2%甲酸水溶液5ml调节pH为酸性,混匀作为待净化液。
2.含油量较大的试样(巧克力和巧克力制品、糕点、调制乳粉、雪糕、复合调味料和冰淇淋等):
1)准确称取糕点2g(精确至0.001g),置于50mL离心管中,加入20mL石油醚,涡旋1min,超声或振摇(速率≥250r/min)提取10min,9000r/min离心5min,弃去上清液,油脂含量高的可重复提取一次,弃去上清液。
2)加入25mL乙醇氨水溶液,涡旋1min,50℃超声或振摇(速率≥250r/min)20min,9000r/min离心5min(若离心后提取液仍然浑浊,可转入高速离心机专用管,15000r/min离心5min),取上清液置于50mL容量瓶中,每次加入约5mL~10mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色,离心后合并上清液,用乙醇氨水溶液定容至50mL,即得提取液。
3)准确吸取上清液5mL,加入2%甲酸水溶液5ml调节pH为酸性,混匀作为待净化液。
【净化】 HPSW PA(250mg/6ml)
(1)活化:依次用6 mL甲醇和6mL水活化,保持柱体湿润。
(2)上样淋洗:将上述待净化液加入小柱中,弃去流出液,再依次用5mL 2%甲酸水和5mL甲醇淋洗,弃去淋洗液,抽干小柱。
(3)洗脱:7mL 5%氨化甲醇洗脱,收集洗脱液,于50℃氮吹至近干。准确加入2mL pH9.0的乙酸铵溶液溶解,过0.45μm 亲水PTFE滤膜,弃去2~5滴初滤液,取续滤液作为待测液。
【参考仪器条件】
仪器:液相色谱Shimadzu LC-16
色谱柱:HPSW AQ-C18(4.6mm×250mm,5μm)
检测器:紫外
检测波长:415nm,520nm,610nm
流速:1ml/min
进样体积:10μL
柱温:35℃
流动相:A为20mmol/L乙酸铵,B为甲醇
洗脱条件:
【实验结果】
新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红7种标准混合液添加水平浓度:5mg/kg(1μg/mL);
靛蓝、亮蓝、柠檬黄、喹啉黄4种标准混合液添加水平浓度:25mg/kg(5μg/mL)
液体基质,扣除基质后回收率如下:
图谱如下:
520nm波长新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红依次出峰。
610nm波长靛蓝、亮蓝1、亮蓝2依次出峰。
415nm柠檬黄、喹啉黄1、喹啉黄2、喹啉黄3、喹啉黄4依次出峰
【注意事项】
1.上样液为酸性才能保证色素被有效吸附。
2.使用亲水滤膜过滤,PVDF或者PTFE。PES、PTFE、PVDF均对赤藓红有不同程度的吸附,其中PES对赤藓红具有较强吸附,过滤前几滴赤藓红单标溶液无色被滤膜完全吸附。所以用PVDF或者PTFE滤头过滤时,也需弃去5~9滴初滤液。
3.定容溶液20mmol/L乙酸铵缓冲液pH=9.0,调节pH后更容易复溶,且色素混合溶液更稳定。
4.靛蓝不是特别稳定,对照品溶液最好临用新配,也不要长时间存放。
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华谱生物科技(重庆)有限公司是一家致力于实验室耗材研发、生产、销售、服务为一体的高新技术企业,也是同时实现色谱填料和筛板样品前处理耗材的生产商。产品广泛应用于各大科研院所、各省市计量院、疾控中心、环境监测站、食品检测公司等。
华谱生物主要产品包括:固相萃取柱、筛板、色谱柱、小柱柱管、QuEChERS(净化管、盐包、陶瓷均质子)、真菌毒素免疫亲和柱、样品瓶盖垫、针式滤器、配套各厂家原子吸收的石墨管和微波消解的消解罐。
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