应用分享 | 糕点中11种合成着色剂的测定

01、国 标 规 定

新国标GB 5009.35-2023《食品中合成着色剂的测定》已经颁布并于2024年3月开始实施，国标中给出了多种样品中11种合成着色剂（柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红、亮蓝、 酸性红、喹啉黄和赤藓红）的液相色谱测定方法。

新版国标与GB 5009.35-2016相比主要有如下4项变化：

• 增加了靛蓝、诱惑红、酸性红和喹啉黄4种合成着色剂；

• 增加和明确了适用基质种类；

• 修改了样品前处理方法和仪器条件；

• 修改了检出限和定量限。

02、实验步骤及结果

-----------------【样 品 提 取】----------------

含油量较大的试样（巧克力和巧克力制品、糕点、调制乳粉、雪糕、复合调味料和冰淇淋等）:

1.准确称取糕点2g（精确至0.001g），置于50mL离心管中，加入20mL石油醚，涡旋1min，超声或振摇（速率≥250r/min）提取10min,9000r/min离心5min，弃去上清液，油脂含量高的可重复提取一次，弃去上清液。

2.加入25mL乙醇氨水溶液，涡旋1min，50℃超声或振摇（速率≥250r/min）20min，9000r/min离心5min（若离心后提取液仍然浑浊，可转入高速离心机专用管，15000r/min离心5min），取上清液置于50mL容量瓶中，每次加入约5mL~10mL乙醇氨水溶液重复提取操作至上清液无明显颜色，离心后合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液。

3.准确吸取上清液10mL，50℃氮气浓缩至3mL左右，分2次~3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解，作为净化液。

 ----------------------【净 化】-----------------

1. 活化：依次用6 mL甲醇和6mL水活化，保持柱体湿润。

2. 上样淋洗：将上述待净化液加入小柱中，弃去流出液，再依次用6mL 2%甲酸水和6mL甲醇淋洗，弃去淋洗液，抽干小柱。

3. 洗脱：6mL 2%氨化甲醇洗脱，分两次加入，收集洗脱液，于50℃氮吹至近干。准确加入2mL pH=9的乙酸铵溶液溶解，过0.45μm 亲水PTFE滤膜，弃去2-5滴初滤液，取续滤液作为待测液。

 --------------【参 考 仪 器 条 件】------------

仪器：液相色谱Shimadzu LC-16

色谱柱：HPSW PR-C18(4.6mm×250mm,5μm)

检测器：紫外

检测波长：415nm，520nm，610nm

流速：1mL/min    进样体积：10μL     柱温：35℃

洗脱条件：

 ------------------【实 验 结 果】---------------

1. 新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红7种标准混合液添加水平浓度：5mg/kg（1μg/mL）；

2. 靛蓝、亮蓝、柠檬黄、喹啉黄4种标准混合液添加水平浓度：25mg/kg（5μg/mL）。

3. 糕点基质，回收率如下：

图谱如下：

520nm波长新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、诱惑红、酸性红、赤藓红依次出峰。

610nm波长靛蓝、亮蓝1、亮蓝2依次出峰。

415nm柠檬黄、喹啉黄1、喹啉黄2、喹啉黄3、喹啉黄4依次出峰。

【注意事项】

1.上样液最好是弱酸性pH=6，上样前可以用pH试纸测试一下，碱性样品无法保证小柱对合成色素良好的吸附。

2.使用亲水滤膜过滤，PVDF或者PTFE。PES、PTFE、PVDF均对赤藓红有不同程度的吸附，其中PES对赤藓红具有较强吸附，过滤前几滴赤藓红单标溶液无色被滤膜完全吸附。所以用PVDF或者PTFE滤头过滤时，需弃去5~9滴初滤液。

3.定容溶液20mmol/L乙酸铵缓冲液pH=9.0，不调pH溶液中性，调节pH后溶液更稳定。

4.基质中含有少量油脂也需要用石油醚去油处理，少量油脂，会导致上样后流速缓慢，亮蓝洗脱效果不好，油脂的影响使得亮蓝与喹啉黄回收率不好。

03、产 品 订 购 信 息

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