四环素类抗生素在动物性食品中的过量残留已成为危及人类健康的公共卫生问题，并严重影响到贸易出口。四环素类药物的毒性反应主要表现为对胃、肠、肝脏的损害及牙齿的染色等，还可能造成过敏反应、二重感染、致畸胎作用。
华谱生物参照《GB 31658.17-2021动物性食品中四环素类、磺胺类和喹诺酮类药物残留量的测定 液相色谱-串联质谱法》采用液相色谱法对猪肉、牛肉基质中四环素类药物残留量进行测定，实验结果表明，回收率介于60%-110%，使用HPSW HLB固相萃取柱可以用液相方法完成液质检测四环素的要求。
本方法的准确度要求，在10μg/kg~500μg/kg添加水平上的回收率为60%~110%。
【溶液配制】
0.05mol/L磷酸二氢钠溶液：取磷酸二氢钠·二水7.8g,用水溶解并稀释至1000mL；
0.05mol/L磷酸氢二钠溶液：取磷酸氢二钠·十二水17.9g,用水溶解并稀释至1000mL；
磷酸盐缓冲液：取0.05mol/L磷酸二氢钠溶液 190mL，用0.05mol/L磷酸氢二钠溶液稀释至1000mL；
Mcllvaine-Na2EDTA缓冲溶液：称取磷酸氢二钠·十二水10.9g、柠檬酸·一水12.9g、乙二胺四乙酸二钠盐·二水39.2g，加水900mL，用1mol/L的氢氧化钠溶液调pH至5.0±0.2，用水稀释至1000mL；
20%甲醇水溶液：取20mL甲醇，用水稀释至100mL。
0.1%甲酸水溶液：取甲酸1mL，用水稀释至1000mL。
三氟乙酸溶液：取0.8mL三氟乙酸，用水稀释至1000mL。
【样品提取】
准确称取粉碎均匀的牛肉、猪肉样品1 g（精确至0.01 g）于干净离心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA溶液，涡旋1min，超声提取20 min，-5℃、12000 r/min离心5 min，取出上清液于另一干净离心管，试样残渣加入8 mL磷酸盐缓冲液，同上述操作，合并两次提取液，-5℃下12000 r/min离心5 min，上清液待净化。
注：1.当样品油脂（猪肉）较多，为了上样流速不受影响，可以在混合提取液里加入10mL正己烷，混匀-5℃、12000 r/min离心5 min，取下层溶液待净化。
2.为了减少上样体积，可以准确称取粉碎均匀的牛肉、猪肉样品2 g（精确至0.01 g）于干净离心管中，加入8 mL Mcllvaine-Na2EDTA溶液，涡旋1min，超声提取20 min，-5℃、12000 r/min离心5 min，取出上清液于50mL容量瓶中，试样残渣加入8 mL磷酸盐缓冲液，同上述操作，合并两次提取液，用Mcllvaine-Na2EDTA与磷酸盐缓冲液混合液（1+1）定容至刻度，然后取5mL作为上样液（也可先用正己烷10mL去脂后取5mL上样）。
【净化】 HPSW HLB（200mg/6ml）
（1）活化：分别用5mL甲醇、5mL水活化HLB小柱
（2）上样淋洗：将上述备用液全部加入小柱中,再依次用5mL 水、20%甲醇5ml淋洗，弃去流出液，吹干小柱。
（3）洗脱：加入10mL甲醇洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，45℃氮吹近干，加入0.1%甲酸溶液定容至1 mL,涡旋1min溶解残渣，过滤膜，上机测试。
【参考仪器条件】
仪器：液相色谱Shimadzu LC-16
色谱柱：AQ-C18(4.6mm×250mm,5μm)
检测器：紫外检测波长：350nm
流速：1ml/min
进样体积：50μL
柱温：30℃
流动相：A：三氟乙酸溶液，B：乙腈
洗脱条件：
【实验结果】
猪肉、鸡肉加标水平浓度：500μg/kg（0.5μg/mL）
图1-标准溶液图
图2-牛肉加标图谱
图3-牛肉图谱
图4-猪肉加标图谱
图5-猪肉图谱
【注意事项】
①本次实验只做了四环素类药物的测试，回收率满足要求；
②混合好的提取液，最好低温离心后再上样，可以加快上样后的流速。
③提取液需要按标准配制，如果想减少上样体积可以选择华谱生物优化的提取方式上样5mL，体积少，上样快；
④油脂较多的肉类，可以用正己烷除脂，然后再上样，这样流速快。
关于华谱生物
华谱生物科技（重庆）有限公司是一家致力于实验室耗材研发、生产、销售、服务为一体的高新技术企业，也是同时实现色谱填料和筛板样品前处理耗材的生产商。产品广泛应用于各大科研院所、各省市计量院、疾控中心、环境监测站、食品检测公司等。
华谱生物主要产品包括：固相萃取柱、筛板、色谱柱、小柱柱管、QuEChERS（净化管、盐包、陶瓷均质子）、真菌毒素免疫亲和柱、样品瓶盖垫、针式滤器、配套各厂家原子吸收的石墨管和微波消解的消解罐。
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