【标准溶液的配制】

脱氢乙酸标准储备液（1.00mg/mL）：准确称取100.0mg（精确至0.1mg）标准品于100mL容量瓶中，用10mL氢氧化钠溶液溶解，用水定容。4℃保存，有效期3个月。

标准系列工作液：分别准确吸取标准储备液(1.0mg/mL):0.1mL、1.0mL、5.0mL、10mL、20mL于100mL容量瓶中，用水定容至刻度，摇匀，配制成质量浓度分别为1.00μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L和200μg/L标准系列工作液。

【试液配制】

乙酸铵溶液(0.02mol/L)：称取1.54g乙酸铵，溶于水并稀释至1L。

10%甲酸溶液：量取10mL甲酸，加水90mL，混匀。

氢氧化钠溶液（20g/L）：称取20g氢氧化钠，溶于水并稀释至1L。

硫酸锌溶液（120g/L）：称取120g硫酸锌，溶于水并稀释至1L。

甲醇溶液（70%）：量取70mL甲醇，加水30mL，混匀。

【样品提取】  

1.酱菜、发酵豆制品:

称取酸菜2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入约 10mL 水、5mL硫酸锌溶液，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，超声提取10min，8000r/min离心10min。取上清液过0.45μm有机滤膜，供高效液相色谱测定。

若高效液相色谱分离效果不理想，则取20mL上清液，用10%的甲酸调pH至5，定容到 25mL，取5mL待净化。 

2.面包、糕点、烘烤食品馅料、复合调味料：

称取月饼2g（精确至0.001g）试样于50mL离心管中，加入约 10mL 水、5mL硫酸锌溶液，用氢氧化钠溶液调pH至7.5，转移至50mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，超声提取10min，转移到分液漏斗中，加入10mL正己烷，振摇1min，静置分层，弃去正己烷层，加入10mL正己烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，8000r/min离心10min。取上清液过0.45μm有机滤膜，供高效液相色谱测定。

若高效液相色谱分离效果不理想，则取20mL上清液，用10%的甲酸调pH至5，定容到 25mL，取5mL待净化。 

【净化】  HPSW  C18 固相萃取柱（500mg/6ml）

（1）活化：依次用5mL甲醇、10mL水

（2）上样淋洗：将5mL待净化液过柱，弃去流出液，依次用5ml水淋洗，弃去淋洗液，真空抽至柱体近干。

（3）洗脱：用2 mL70%甲醇溶液洗脱，收集洗脱液，涡旋混匀，过0.45μm有机滤膜，上机。

【参考仪器条件】

仪器：液相色谱Shimadzu LC-16

色谱柱：HPSW AQ-C18(250mm×4.6mm,5μm)

检测器：紫外

检测波长：293nm

流速：1.0ml/min 

进样体积：10μL 

柱温：30℃

流动相：甲醇+0.02mol/L乙酸铵（10+90，体积比）

【实验结果】加标水平浓度：0.015g/kg（30μg/mL）

基质加标回收率数据

图1-标准溶液图

图2-酸菜加标图

图3-酸菜样品图

图4-月饼加标图

【注意事项】

①标准中用氢氧化钠溶液调节pH至7.5是为了保证脱氢乙酸更好的从基质中释放进入提取液，pH调制6.5-7.5均可，比如酸菜基质pH在3左右，无法更好的提取目标物。

②用10%甲酸溶液调节pH至5，是为了保证样品溶液目标物更加充分的吸附在小柱上。

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