技术︱口蹄疫防控(二)

细节管理专家！0595-22851909

防非专家--生物安全体系专家

口蹄疫防控（二）

 

二、FMD疫苗

FMD疫苗的种类

n 灭活疫苗

病毒生产工艺；灭活工艺；佐剂及配苗工艺。

n 活疫苗

至70年代末，国际上除了委内瑞拉和亚洲某些地区还使用活疫苗外，几乎不再研制和使用。

n  新型疫苗（分子疫苗）

基因工程亚单位疫苗；可饲（食）疫苗 ；合成肽苗 ；蛋白质载体疫苗；基因缺失疫苗；活载体疫苗；核酸疫苗。

三、常见的FMD免疫理论与实践问题

n  交叉免疫

n  抗原荷载量及免疫剂量与疫苗效力的关系

n  血清抗体滴度与保护力的关系

n  免疫程序

n  影响疫苗效力的原因分析

n  疫苗不良反应

3.1 FMD交叉免疫问题

n  FMDV变异性极强，有七个血清型，型间无交叉保护，但有低水平免疫交叉反应。事实上FMD病毒的血清型是一个较连续的抗原变异谱系；同一血清型的不同毒株之间抗原位点的位置及结构也有一定差异。

n  不同血清型FMD病毒免疫动物产生保护性所需的抗原量是不同的。Pay等（1987）报道，要达到50％的保护率，O型140S抗原需要量是220ng；A型为2.4ng；C型为4.36ng。从免疫抗体水平来比较，要达到50％的保护率，要求O型中和抗体效价（logSN50）为2.14，A型和C型则分别为1.17和1.41。

n  同时接种不同血清型的FMD单价疫苗或多价疫苗，彼此之间不存在免疫效力相互干扰的现象。

n  在接种FMD疫苗的同时，接种其他非免疫抑制性疫病的疫苗，彼此之间也不存在免疫效力相互干扰的现象。

3.2 抗原荷载量及免疫剂量
与疫苗效力的关系

n  足够的抗原荷载量是决定疫苗效力的关键因素之一。不同血清型和不同疫苗毒株生产有效疫苗时所需抗原量不同。一般而言,  O 型比 C, A and Asia 1 型所需要的抗原量大。疫苗中的抗原含量一般在 1～  10 ug/剂.

n  效力较低的常规预防用疫苗，加大剂量，可增强免疫效果。

3.3 抗体水平与保护力的关系

SNT和LPB-ELISA被认为是与动物保护实验最有相关性的检测方法，但仍无法替代本动物攻毒试验。

    原因：

q一是有些抗体水平低于最低保护滴度的动物能够抵抗强毒攻击；

q二是牛的抗体水平与实际保护力相关性较高，而猪则较低；

q三是有些多肽疫苗、基因工程疫苗等分子疫苗虽然能诱导动物产生高滴度中和抗体，但却没有保护性。

猪、牛、羊在FMD感染、排毒及免疫方面的差异

n  猪大量发生FMD始于20世纪60代末，主要发生于亚洲地区。FMD病毒在猪体中的适应性变异显然不同于牛、羊，由此衍变出的猪体适应毒株也必然有别于牛、羊毒。英美欧等国积累多年的研究结果均以牛FMD为主，罕有可资借鉴的猪FMD研究资料。因此，有许多与猪FMD免疫相关的问题难以明确回答。

n  与牛相比，猪对FMD的免疫反应相对钝感。给猪接种牛用传统疫苗只能产生相当于牛的半期保护。感染康复牛的保护力通常可保持1－2年，而猪则不稳定，长则不超过1年，短则1个月。要获得较好的免疫保护，必需增加免疫次数，加大免疫剂量。并且，猪对FMD的免疫应答机理明显有别于牛，表现在中和抗体水平与保护力之间缺乏相关性。

n  目前对猪的FMD免疫主要着眼于三点，一是用猪体分离毒为疫苗毒；二是加大有效抗原量和免疫次数；三是寻求科学检测方法。

n  羊对FMD相对钝感。

n  亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒可在牛、猪、羊之间相互传染并引起发病。

3.4 免疫程序

FMD免疫抗体的变化特点及消长规律

n  康复畜：3～7d产生抗体，14～21d进入平台期。（ IgM→IgG ）

牛：通常为1-2年。

猪：不稳定。有些6-12个月；有些在康复后1-3个月内还发病。

羊：12个月左右。   

n  人工免疫动物 ：

首免后3-4天产生免疫抗体，14-28天达到峰值，一般能保持3-4个月。通常在首免后约1个月进行二免。对于疫区动物，每4-6个月免疫一次，对于常年多次免疫的种畜，通常每年免疫1-2次。经二次免疫后，抗体可保持6-12个月。

n  母源抗体：

1-3天达到高峰。其后，缓慢下降。犊牛母源抗体的半衰期为22-23天，持续期3-5个月；仔猪母源抗体的半衰期为21-23天，持续期约为2个月。

           

n  非结构蛋白抗体

 包括L、2B、2C、3D、3ABC等，但3ABC抗体被认为是最可靠衡量感染与免疫动物的一项指标。3A的免疫原性强，3C可增加3ABC的检测特异性。感染动物3ABC抗体的持续时间较长。感染FMD牛最早可于3-4天检测出3ABC抗体，抗体持续期通常在9个月以上，少数可长达2年。

推荐的免疫策略（参考）

n  紧急接种

紧急接种是指在发生口蹄疫时，为了迅速控制和扑灭疫病的流行，对疫区尚未发病的动物和受威胁区动物进行的应急性免疫接种。进行紧急接种时，应掌握下述原则：

1．用于紧急接种的疫苗，免疫效力最好达每头剂5个PD50以上。否则，免疫剂量应加倍。

2．采用环形免疫注射方法，由疫区外向内开展疫苗注射工作。先从安全区开始，再注射受威胁区，最后注射疫区内的安全畜群和受威胁畜群。严禁疫区的工作人员到非疫区进行免疫注射工作。

 3．采取首免与二免相结合的免疫程序，首免2～4周后加强免疫一次。

4．免疫剂量按使用说明书执行。

n  非疫区免疫接种

1．非疫区应采用计划免疫。所谓计划免疫或预防接种，是指对目前尚未发生疫情，但存在发生疫情的危险，或受邻近疫情威胁的地区，为了防患于未然，在平时有计划地给健康畜群进行的免疫接种。

 2．用于计划免疫接种的疫苗，免疫效力应达3个PD50/剂以上。

  3．根据本地区疫情的风险种类和风险程度，确定疫苗种类。

4．按免疫程序，实施计划免疫接种。

n  疫区免疫接种

1．O型口蹄疫流行地区：用口蹄疫O型单价灭活疫苗，进行常规免疫预防接种。

2．O型和Asia-1型口蹄疫流行地区：分别肌肉接种或同时不同部位肌肉接种口蹄疫Asia-1型和O型单价灭活疫苗，但注射器及针头须严格分开；或注射口蹄疫O、Asia-1型双价灭活疫苗。

3．O型、A型和Asia-1型口蹄疫流行地区：分别肌肉接种或同时不同部位肌肉接种口蹄疫Asia-1型和O、A型双价灭活疫苗，但注射器及针头须严格分开；或注射口蹄疫O、A、Asia-1型三价灭活疫苗。

推荐的免疫程序（参考）

n  免疫途径及剂量

 肌肉注射，进针要达到足够深度，保证将疫苗注入肌肉。免疫剂量按使用说明书执行。

n  新生幼畜的免疫程序

免疫或康复母牛所生犊牛，于生后2.5月免疫，其它不限；免疫或康复母猪所生仔猪，于生后1.5个月免疫，其它于生后30天免疫；免疫或康复母羊所生羔羊，于生后1.5个月免疫，其它不限。

n  非疫区的免疫程序

牛：首免后，每隔6个月接种1次。

猪：首免后，间隔4～5周进行第2次免疫，种猪每隔6个月免疫1次。

  羊：首免后，每隔6个月接种1次。

n  疫区免疫程序

牛：流行初期接种2次，以后每隔4个月接种1次。

 猪：仔猪14日龄时首免，间隔4～5周进行第2次免疫，如果生长期超过6个月，应于3月龄时再免疫1次。种猪于首免后，每隔4个月免疫1次。

羊：流行初期接种2次，以后每隔6个月接种1次。

3.5 不良反应及解决措施

n  正常反应：进行FMD疫苗免疫接种时，个别动物会出现轻微的局部或全身反应，如注射部位轻微肿胀，暂时性减食反应和精神沉郁等。这些均属正常现象，不经任何处理，2～3天后，上述症状会自行消失，不影响动物的生产性能。

n  严重反应：和正常反应在性质上没有区别，但程度较重或发生反应的动物数超过正常比例。引起严重反应的原因很复杂。或由于某一批生物制品质量较差，或是使用方法不当，如接种剂量过大、接种技术不正确、接种途径错误等；或是个别动物对某种生物制品过敏，这类反应通过严格控制制品质量和遵照使用说明书可以减少到最低限度，只有在个别特殊敏感的动物中才会发生。

n  偶合症：是指与正常反应性质不同的反应。主要包括：超敏感(过敏休克、变态反应等)和诱发潜伏期感染中的其它疫病。同一地区，同一种家畜，在同一季节内往往可能有两种以上疫病流行。超敏感动物往往表现为在注射进行中或注射后几秒钟、数分钟内，突然发生晕厥，或过敏性休克，患畜倒地，口吐白沫，丧失知觉，大小便失禁等。数分钟内自然康复或死亡。它是机体受刺激后，引起反射性周围血管扩张而致的一时性脑贫血。遇到这种情况，应将动物的头位放低，安静休息。若数分钟内不能恢复，可皮下注射1%肾上腺素。

3.6 影响FMD疫苗免疫效果的因素

n  疫苗效力

n  疫苗储存及冷链设施

n  疫苗使用过程中的人为因素

n  疫苗毒株与流行毒株之间的抗原差异

n  母源抗体的影响

n  免疫抑制性疾病或因素的干扰

n  免疫接种的规模和实效性。

n  免疫程序的合理性

四、免疫效果和水平监测

n  无论是紧急接种还是常规免疫，实施计划免疫的国家和地区要适时监测使用疫苗后，动物群体的免疫效果和免疫水平。一方面可以及时掌握动物群体抵御强毒侵袭的能力，对加强免疫和及时补针提出依据，另一方面可以了解疫苗的实际防疫效果，对改进和提高疫苗效力及接种质量有积极的推动作用。

n  免疫动物的血清抗体水平与抗强毒侵袭的免疫保护有一定的正相关。因此，监测动物血清抗体水平，可以间接反应免疫效果和水平。对已经实施了免疫接种的群体动物而言，因为动物的品种和个体生理状态的不同，所产生的免疫应答水平势必有差异，必需监测免疫动物的群体抗体水平，以评估动物群体的免疫水平和抗感染能力。

动物群体免疫效果监测的方法

n  病毒中和试验：FMD病毒接种敏感细胞（如BHK等）后，在光学显微镜下可见到特定的生物学效应。血清中的中和性抗体能阻断FMD病毒产生的这种生物学效应。本方法是以这种生物效应来指示和量化抗体与活病毒的反应程度，测定免疫血清中和抗体滴度。免疫血清中和抗体滴度是指能保护50％细胞免于出现致细胞病变效应的血清最高稀释度，它是除本动物保护试验之外，能较为客观准确地反应免疫动物抵抗感染的量化指标之一。该方法操作较为简便，结果可靠。分为常量法、半微量法、微量法三种。微量法是OIE国际贸易指定的方法。本方法的缺点是须动用活毒，只能在专门的实验室进行。

n  ELISA：该方法利用酶对底物的催化反应特性，将酶与抗体偶联并使之参与到抗原抗体反应中，依据酶催化底物所发生的变色反应程度，来指示和量化抗原抗体的反应水平。其优点是敏感、特异、重复性好、安全、操作简便。目前，国际粮农组织(FAO)、OIE和原子能机构(LAEA)已向世界各国推行和推荐该方法，以部分替代病毒中和试验。