关于阿奇霉素，你知道多少？
阿奇霉素是半合成的十五元大环内酶类抗生素，对多种细菌有良好的杀灭作用，适用于敏感菌株及沙眼衣原体等所引起的一系列感染，如支气管炎、肺炎、急性中耳炎、扁桃体炎等。
因其每天给药一次使用方便，用药前无需皮试，安全性高，且对肺炎支原体有独特疗效，在儿童中使用非常广泛。
高效液相色谱法测定阿奇霉素含量方便、快捷，且具有良好的重现性及灵敏度。悟空 K2025高效液相色谱仪可以满足《中国药典（2020年版）》中阿奇霉素含量测定的需求。
实验原理
阿奇霉素在210 nm处有紫外吸收，使用高效液相色谱法测定，外标法定量。
色谱条件
悟空K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱： C18，4.6×250 mm，5 µm；
流动相：磷酸氢二钾溶液（称取磷酸氢二钾8.7 g，加水至1000 mL，用20%磷酸溶液调节pH值至8.2）-乙腈=45:55；
流速：1.0 mL/min；
柱温：30℃；
检测器及波长：紫外-可见光检测器，检测波长为210 nm；
进样量：50 μL。
实验结果
按照色谱条件进行采集，阿奇霉素标准溶液（浓度为0.20 mg/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 阿奇霉素标准溶液的色谱图
表1 阿奇霉素标准溶液色谱图积分结果
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目标物 |
阿奇霉素 |
|
保留时间（min） |
26.008 |
|
峰面积（mAU.s） |
807.401 |
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峰高（mAU） |
22.027 |
|
理论塔板数 |
13412 |
|
分离度 |
- |
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对称/拖尾因子 |
2.08 |
由表1中数据可知，阿奇霉素峰的理论塔板数为13412。
将阿奇霉素标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2 阿奇霉素标准溶液的色谱图
表2 阿奇霉素标准溶液连续进样7针重复性数据统计
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目标物 |
阿奇霉素 |
|
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保留时间(min) |
峰面积(mAU.s) |
|
1 |
26.033 |
803.117 |
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2 |
26.008 |
807.401 |
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3 |
26.008 |
810.016 |
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4 |
25.975 |
803.526 |
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5 |
25.983 |
804.508 |
|
6 |
25.942 |
807.490 |
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7 |
25.925 |
810.604 |
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平均值 |
25.982 |
806.666 |
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RSD% |
0.148 |
0.376 |
将标准溶液连续进样7针进行重复性测试，阿奇霉素保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%，具有良好的定性定量重复性。
校准曲线
按照色谱条件将阿奇霉素系列标准工作液上机测定，阿奇霉素在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.9999。阿奇霉素系列标准工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 阿奇霉素系列标准工作液叠加的色谱图
供试品测定
取供试品适量，精密称定，加乙腈溶解并定量稀释制成每1 mL中约含1 mg的溶液。
按照步骤对供试品溶液进行采集、计算，空白溶液的色谱图、供试品溶液的色谱图如图4—图5所示。
图4 空白溶液的色谱图
图5 供试品溶液的色谱图
经计算，该供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。
通过对阿奇霉素的理论塔板数、重复性、灵敏度、线性进行测试，实验结果表明：
阿奇霉素峰的理论塔板数为13412，满足《中国药典（2020年版）》中规定的理论塔板数按阿奇霉素峰计算不低于3000的要求；
在重复性测试中，阿奇霉素标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.148%，峰面积的RSD为0.376%，具有良好的定性定量重复性；阿奇霉素的仪器检出限为0.570 μg/mL，仪器定量限为1.898 μg/mL；阿奇霉素在测定浓度范围内具有良好的线性关系（R2＞0. 9999）。对供试品进行测定，供试品中阿奇霉素的含量为101.2%。
因此，Wooking K2025高效液相色谱仪可以满足《中国药典（2020年版）》中阿奇霉素含量测定的需求。