【悟空实验室】如何轻松应对HPLC堵塞问题？（一）

PART 01

色谱柱堵塞处理攻略

当色谱柱出现堵塞时，首先可以尝试使用合适的流动相低流速冲洗。例如，对于C₁₈色谱柱，可以使用10%甲醇水溶液以0.1 mL/min的流速进行冲洗，持续时间应超过12小时。这种低流速的冲洗方式可以确保流动相充分渗透到色谱柱的每一个空隙，有效去除堵塞物质。

在冲洗过程中，需要密切观察色谱柱的冲洗效果。如果冲洗后色谱柱的压力恢复正常，峰形和分离度也得到改善，则说明冲洗有效。然而，如果冲洗效果不明显，则需要考虑其他处理方法。

如果低流速冲洗效果不佳，可以尝试进行反向冲洗。反向冲洗是将流动相的流向与正常分析时的流向相反，从色谱柱的出口端注入流动相，从入口端流出。这种冲洗方式可以更有效地去除色谱柱中的堵塞物质。但是，需要注意的是，不是所有的色谱柱都支持反向冲洗，需要查阅色谱柱的使用说明书或咨询厂家。

如果经过低流速冲洗和反向冲洗后，色谱柱的堵塞问题仍未解决，那么可能需要更换新的色谱柱。在选择新的色谱柱时，需要考虑色谱柱的型号、规格、填料等因素，以确保与现有实验条件相匹配。

PART 02

流通池及其管路堵塞处理攻略

拆下流通池出口端ETFE背压管，如果压力有明显下降，说明背压管发生堵塞。

处理方法：反向连接此管路，用水或异丙醇以0.2 mL/min的流速反向冲洗（注意：冲洗过程中需要保持压力低于800 psi。）；或者将此管路放在水（50℃温水）或异丙醇中超声处理；如果上述处理方法均没有效果，就需要更换新的背压管了。

拧下流通池入口管路，如果压力明显下降，说明流通池内部有堵塞问题。此时拆下流通池，检查流通池内部管路和池窗。

如果是管路堵塞，按照色谱柱堵塞处理攻略冲洗管路或者更换新的管路；

如果是池窗中的盐渍或生菌引起的堵塞，可以用水或异丙醇以0.2mL/min的流速冲洗流通池（注意：冲洗过程中需要保持压力低于800psi。）；或者拆下流通池透镜后用水或异丙醇超声流通池主体部分（注意：流通池透镜下有垫片，不可损坏或者丢失），流通池透镜清洗干净后用擦镜纸擦拭干净。