头孢克洛及其有关物质的测定 高效液相色谱法

K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

色谱柱：C₁₈色谱柱，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；

流动相：

流动相A：0.78%磷酸二氢钠溶液(pH=4.0)

流动相B：乙腈 : 0.78%磷酸二氢钠溶液(pH=4.0)=45 : 55

流速：1.0 mL/min；

柱温：35℃；

检测器及波长：检测器为紫外-可见光检测器，检测波长为220 nm；

进样量：20 μL。

系统适用性溶液色谱图中，头孢克洛峰的保留时间约为23分钟，头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度应不小于2.0，头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2。

供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积的0.5倍（0.5%），各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍（2%），小于对照溶液主峰面积0.1倍的峰忽略不计。

按照上述色谱条件进行采集，系统适用性溶液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

图1  系统适用性溶液的色谱图

表1  系统适用性溶液色谱图积分结果

由表1中数据可知，头孢克洛峰的保留时间为23.742 min，满足《中国药典（2020年版）二部》中头孢克洛峰的保留时间约为23分钟的要求；头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度为10.92，满足《中国药典（2020年版）二部》中头孢克洛峰与头孢克洛δ-3-异构体峰之间的分离度应不小于2.0的要求；头孢克洛峰的拖尾因子为0.96，满足《中国药典（2020年版）二部》中头孢克洛峰的拖尾因子应小于1.2的要求。

供试品溶液的色谱图如图2所示，积分结果如表2所示。

图2  供试品溶液的色谱图

表2  供试品溶液色谱图积分结果

对色谱图中主峰及各个杂质峰进行积分，计算各杂质的含量。

由表2中数据可知，峰面积小于对照溶液主峰面积0.5倍且大于对照溶液主峰面积0.1倍的杂质峰共有10个，且各杂质含量在0.11%~0.29%之间；总杂的含量为1.76%，不大于限度2%。

对照溶液的色谱图如图3所示。

图3  对照溶液的色谱图

将对照溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图4所示，统计结果见表3。

图4  对照溶液连续进样7针叠加的色谱图

表3  对照溶液连续进样7针重复性数据统计

由表3中数据可知，对照溶液连续进样7针重复性测试，头孢克洛保留时间的RSD为0.099%，峰面积的RSD为0.083%，具有良好的定性定量重复性。

灵敏度溶液的色谱图如图5所示，灵敏度计算结果见表4。

图5  仪器灵敏度的色谱图

表4  头孢克洛灵敏度计算结果

由表4中数据可知，头孢克洛灵敏度溶液的信噪比S/N为101.7。