连翘中连翘苷和连翘酯苷A的含量测定 高效液相色谱法

连翘，是大家熟悉的一味中药，具有抗微生物，抑制磷酸二酯酶、脱氧酶的作用，其功效有镇吐，抗肝损伤、抗炎，抑制弹性蛋白酶活性，降低自发性高血压等。

连翘苷和连翘酯苷A是连翘中主要的活性成分。本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定连翘中连翘苷和连翘酯苷A的含量。

实验方案

K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 UVD紫外-可见光检测器、Wookinglab色谱工作站；

连翘苷的色谱条件

色谱柱: C₁₈，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；

流动相：乙腈-水（25:75）；

流速：1.0 mL/min；

进样量：10 μL；

柱温：35℃；

检测器及检测波长：紫外-可见光检测器，277 nm。

连翘酯苷A的色谱条件

色谱柱: C₁₈，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；

流动相：乙腈-0.4%冰醋酸溶液（15:85）；

流速：0.6 mL/min；

进样量：10 μL；

柱温：35℃；

检测器及检测波长：紫外-可见光检测器，330 nm。

实验结果

按照色谱条件分别进行采集，连翘苷对照品工作液的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。

图1  连翘苷对照品工作液的色谱图

表1  连翘苷对照品工作液积分结果

由表1中数据可知，连翘苷峰的理论塔板数为16605，满足《中国药典（2020年版）一部》中连翘苷峰理论塔板数不低于3000的要求；拖尾因子为1.03，具有良好的峰形。

连翘酯苷A对照品工作液的色谱图如图2所示，积分结果如表2所示。

图2  连翘酯苷A对照品工作液的色谱图

表2  连翘酯苷A对照品工作液积分结果

由表2中数据可知，连翘酯苷A峰的理论塔板数为13306，满足《中国药典（2020年版）一部》中连翘酯苷A峰理论塔板数不低于5000的要求；拖尾因子为0.94，具有良好的峰形。

将连翘苷对照品工作液连续进样7针，叠加色谱图如图3所示，结果如表3所示。

图3  连翘苷对照品工作液连续进样7针叠加的色谱图

表3  连翘苷对照品工作液连续进样7针重复性数据统计

由表3中数据可知，连翘苷对照品工作液连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.157%，峰面积的RSD为0.693%，具有良好的定性定量重复性。

将连翘酯苷A对照品工作液连续进样7针，叠加色谱图如图4所示，结果如表4所示。

图4  连翘酯苷A对照品工作液连续进样7针叠加的色谱图

表4  连翘酯苷A对照品工作液连续进样7针重复性数据统计

由表4中数据可知，连翘酯苷A对照品工作液连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.172%，峰面积的RSD为0.592%，具有良好的定性定量重复性。

连翘苷供试品溶液的测定

青翘提取液的色谱图如图5所示。

图5  青翘提取液的色谱图

经计算，青翘中连翘苷的含量为1.28%，《中国药典（2020年版）一部》中规定，连翘按干燥品计算，含连翘苷不得少于0.15%，故该青翘药材满足药典要求。

将青翘提取液连续进样7针，叠加色谱图如图6所示，结果如表5所示。

图6  青翘提取液连续进样7针叠加的色谱图

表5  青翘提取液连续进样7针重复性数据统计

由表5中数据可知，青翘提取液连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.162%，峰面积的RSD为0.512%，具有良好的定性定量重复性。

连翘酯苷A供试品溶液的测定

青翘提取液的色谱图如图7所示。

图7  青翘提取液的色谱图

经计算，青翘中连翘酯苷A的含量为8.49%，《中国药典（2020年版）一部》中规定，按干燥品计算，青翘含连翘酯苷A不得少于3.5%，故该青翘药材满足药典要求。

将青翘连续进样7针，叠加色谱图如图8所示，结果如表6所示。

图8  青翘连续进样7针叠加的色谱图

表6  青翘连续进样7针重复性数据统计

由表6中数据可知，青翘提取液连续进样7针重复性测试，保留时间的RSD为0.343%，峰面积的RSD为0.722%，具有良好的定性定量重复性。

实验结论

本文使用悟空K2025高效液相色谱仪测定连翘中连翘苷和连翘酯苷A的含量。

本实验使用反相色谱，采用等度洗脱条件，实验结果表明，连翘苷和连翘酯苷A的理论塔板数分别为16605和13306，均满足《中国药典（2020年版）一部》中对目标物理论塔板数的要求；连翘苷对照品工作液重复性测试中，保留时间的RSD为0.157%（n=7），峰面积的RSD为0.693%（n=7）；连翘酯苷A对照品工作液重复性测试中，保留时间的RSD为0.172%（n=7），峰面积的RSD为0.592%（n=7），均具有良好的定性定量重复性；

青翘药材供试品溶液连续进样7针，连翘苷保留时间的RSD为0.162%，峰面积的RSD为0.512%；连翘酯苷A保留时间的RSD为0.343%，峰面积的RSD为0.722%，均具有良好的定性定量重复性；对青翘样品进行测定，其中连翘苷的含量为1.28%，连翘酯苷A的含量为8.49%，均满足《中国药典（2020年版）一部》的要求。

因此，Wooking K2025可以满足连翘中连翘苷和连翘酯苷A含量测定的需求。