EXPERIMENT
呕吐毒素藏身啤酒
天气渐热，啤酒又回归消费者餐桌。近日，香港消费者委员会对市面上常见的30款啤酒成分进行了检测，多数品牌均显示合格，但有个别品牌指标异常。
其中，某知名啤酒的检测结果显示，实际酒精含量比标注含量略高，且检出摄入过量对人体有害的呕吐毒素（又称雪腐镰刀菌烯醇，缩写为DON），检出量为26 μg/kg。
呕吐毒素究竟是什么？是否威胁消费者的健康呢？如何检测？
呕吐毒素是什么？
DON属于单端孢霉烯族化合物，主要由禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、串珠镰刀菌、拟枝孢镰刀菌、粉红镰刀菌、雪腐镰刀菌等镰刀菌产生。DON是食品中常见的真菌毒素，广泛存在于全球，主要污染小麦、大麦、玉米等谷类作物，也污染粮食制品。
当人摄入了被DON污染的食物后，会导致厌食、呕吐、腹泻、发烧、站立不稳、反应迟钝等急性中毒症状，严重时损害造血系统造成死亡。
国家标准《GB/T 5009.111-2016 食品中脱氧雪腐镰刀菌烯醇及其乙酰化衍生物的测定》中有相关检测要求。
本文以测定陈醋中呕吐毒素含量为例进行介绍。
实验方案
色谱条件：
K2025高效液相色谱仪：K2025 P2二元高压输液泵、K2025 AS自动进样器、K2025 CO柱温箱、K2025 DAD二极管阵列检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱：C18色谱柱，4.6×250 mm，5 μm或者相当的色谱柱；
流动相：甲醇：水=20:80；
流速：0.8 mL/min；
进样量：50 μL；
柱温：35℃；
检测器及检测波长：二极管阵列测器，检测波长为218 nm。
实验结果
重复性测试
按照色谱条件进行采集，DON标准溶液（浓度为500 ng/mL）的色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
图1 DON标准溶液的色谱图
表1 DON标准溶液色谱图积分结果
|
目标物 |
DON |
|
保留时间（min） |
12.994 |
|
峰面积（mAU.s） |
85.498 |
|
峰高(mAU) |
5.213 |
|
理论塔板数 |
14914 |
|
分离度 |
- |
|
对称/拖尾因子 |
1.12 |
由表1中数据可知，DON峰的理论塔板数为14914，对称因子为1.12，具有良好的峰形。
将DON标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
图2 DON标准溶液连续进样7针叠加的色谱图
表2 DON标准溶液连续进样7针重复性数据统计
|
目标物 |
DON |
|
|
项目 |
保留时间 （min） |
峰面积 （mAU.s） |
|
1 |
12.994 |
85.498 |
|
2 |
12.989 |
84.933 |
|
3 |
12.996 |
85.967 |
|
4 |
13.009 |
86.461 |
|
5 |
13.009 |
86.093 |
|
6 |
13.009 |
85.622 |
|
7 |
13.009 |
84.634 |
|
平均值 |
13.002 |
85.601 |
|
RSD% |
0.068 |
0.755 |
由表2中数据可知，将DON标准溶液连续进样7针进行重复性测试，DON峰保留时间的RSD为0.068%，峰面积的RSD为0.755%，具有良好的定性定量重复性。
含量测定
按照色谱条件，将DON系列标准工作液上机测定，DON在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999。
DON系列标准工作液叠加的色谱图如图3所示。
图3 DON系列标准工作液叠加的色谱图
按照色谱条件，对供试品溶液、供试品加标溶液进行采集，计算DON的含量。
图4 供试品溶液的色谱图
图5 供试品加标溶液的色谱图
经计算，陈醋样品中DON的含量为46.29 μg/kg，加标回收率为92.0%。
实验结论
本文使用Wooking K2025高效液相色谱仪测定陈醋中的DON。实验使用甲醇-水（20:80）为流动相，采用反相色谱体系，实验结果表明：
DON峰的理论塔板数为14914，对称因子为1.12，具有良好的峰形；
连续进样7针重复性测试中，DON峰保留时间的RSD为0.068%，峰面积的RSD为0.755%，具有良好的定性定量重复性；
DON在测定浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999；
陈醋样品中DON的含量为46.29 μg/kg，其加标回收率为92.0%。
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